植物内生真菌来源的混源萜类化合物D1399和内酯类化合物D1952的抗肿瘤活性研究

发布时间：2018-03-11 01:13

本文选题：混源萜　切入点：藏药大花绿绒蒿　出处：《广东药科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：藏药大花绿绒蒿已是濒危植物,但其化学成分和药理活性研究目前依然不充分。本研究中的四个化合物为藏药大花绿绒蒿内生真菌来源的混源萜类化合物,化学结构新颖,其中D1399为新的天然产物,因此本文通过体内和体外肿瘤活性研究,探讨藏药大花绿绒蒿内生真菌中混源萜类抗肿瘤活性,深入探索D1399化合物的抗肺癌作用的分子机制,希冀阐明该植物的药用价值的物质基础和发现新的抗肿瘤活性化合物,并对合理开发和保护本属植物资源提供借鉴。此外,为进一步发展海洋中药,本文通过研究国家海洋生物天然产物库中共1579个单体化合物对人乳腺癌细胞(MDA-MB-435)生长的体外抑制作用,初步探究海洋生物来源抗肿瘤活性天然产物,并对红树林老鼠|内生真菌来源的内酯类化合物D1952的抗肿瘤活性及其作用机制进行了研究,并希望能发现高效的抗肿瘤先导化合物。本研究通过计算机药物靶点研究对D1952化合物的进行了靶点预测;四甲基二氮唑蓝(MTT)比色法初步研究藏药大花绿绒蒿内生真菌来源四个混源萜类化合物和红树林老鼠|内生真菌来源的内酯类化合物D1952抗肿瘤活性,并深入探究了其的抗肿瘤表达谱以及D1399化合物抗肺癌作用和D1952抗乳腺癌作用;接着利用端粒转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)对D1399、D1952化合物引起的细胞凋亡进行检测;流式细胞术检测D1952化合物对细胞周期的影响;同时,免疫印迹(Western blotting)法检测了相关凋亡蛋白以及相关通路蛋白表达量的变化。最后通过人肺癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型对D1399化合物体内抑制H460细胞生长进行了药效学评价。MTT结果显示,D1399、D1403、D2232分别对MDA-MB-435人乳腺癌细胞,HepG2人肝癌细胞,Calu3人肺腺癌细胞,HCT116人结肠癌细胞都具有高效的细胞生长抑制作用,D2233则相对较弱,其中D1399抑制作用最强;此外,D1399的1?(44)工作浓度的D1399和3?(44)工作浓度的D1952能强烈的抑制人白血病细胞HL-60、K562;人肺癌细胞A549、NCI-H226、H460、PC9、Calu1、Calu3、H1299;人结肠癌细胞HCT116、HCT-15、SW620、COLO205、KM12、HT29;人肾癌细胞SN12C;人胶质瘤细胞U251、SNB19;人前列腺癌细胞PC3;人乳腺癌细胞T-47D、MCF7、MDA-MB-435、MBA-MB-231、MBA-MB-468、BT549;人肝癌细胞HepG2共26株肿瘤细胞的增殖,且抑制作用范围分别为25%~92%、34%~90%;进一步实验发现D1399化合物对人肺癌细胞A549、PC9、Calu1、H1299、H460的IC50分别为1.18?M、1.64?M、0.88?M、1.25?M、3.24?M,D1952化合物对乳腺癌细胞MDA-MB-435的IC50为1.11?M。TUNEL实验结果发现,经D1399和D1952化合物分别作用后,TUNEL染色阳性细胞明显增加,并且呈剂量依赖性。流式细胞术检测发现D1952化合物能引起G1/S期阻滞;Western blotting实验证明,D1399能降低H460和A549细胞中caspase-8,-9,-3和PARP蛋白前体,增加caspase-8,-9,-3成熟体和PARP剪切带,也具有明显的浓度依赖性;此外,同样也能降低AKT的的Thr473和Ser308位点的磷酸化水平。D1952化合物能促进凋亡效应蛋白PARP的裂解,及p-RB降低,同时增加细胞周期抑制蛋白p21表达;裸鼠皮下移植瘤实验中显示,经D1399化合物作用人肺癌细胞H460裸鼠皮下移植瘤后,D1399作用组的瘤重0.48±0.11 g与对照组瘤重0.80±0.21 g相比,抑制率达59.12%。阐明了两种化合物均有望可作为高效的抗肿瘤先导化合物。通过以上总结得到:(1)D1399、D1403、D2232、D2233四个混源萜类化合物均具有一定的抗肿瘤活性,其结构与活性存在一定相关性。初步推测双键和取代基的不同,对它们的活性有影响。(2)D1399化合物为上述四个化合物中最优抗肿瘤活性化合物。体外活性检测结果显示,D1399具有广谱、高效的抗肿瘤细胞增殖的活性。体内抗肿瘤活性研究结果显示,D1399对人肺癌裸鼠异种移植瘤有抑制作用。(3)D1399抗肿瘤活性分子机制研究结果显示,D1399能通过激活外源性凋亡途径和内源性凋亡途径诱导肿瘤细胞H460和A549细胞凋亡;D1399能通过抑制AKT的磷酸化,促进细胞凋亡。(4)在计算机靶点预测中,D1952能稳定靶向结合CDK2,很可能是其直接靶点。(5)D1952具有广谱、高效的抗肿瘤细胞增殖的活性,其抗肿瘤活性分子机制研究结果显示发现D1952能引起G1/S阻滞诱导MDA-MB-435细胞的凋亡。
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【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R29

【参考文献】