生熟三七炮制及其部分药理评价研究

发布时间：2016-10-31 11:40

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《昆明医科大学》 2014年

生熟三七炮制及其部分药理评价研究

周新惠  

【摘要】：三七为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的干燥根,性温,味甘、微苦,归肝、胃经；具有散瘀止血,消肿定痛之功,用于咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛等症。熟三七则有补气补血、强身健体之功,在临床和民间多药食两用,主要用于血虚证,产后虚弱,气血不足等；也可用于身体虚弱,气血不足,症见面色苍白、头昏眼花、四肢无力、食欲不振。 目前生三七的相关研究不少,但对三七炮制品的研究不多。作为一种常用中药,2010版《药典》中只有三七生品。三七的炮制方法多是高压蒸制,对常压蒸制、油炸以及其他炮制方法的研究不多。本实验通过对三七进行含量测定、炮制、指纹图谱、药理研究,系统阐述三七炮制前后化学成分变化和药理差异,为深入研究三七炮制机理奠定基础。研究方法及结果如下： 1三七中五种皂苷类成分和三七素的含量测定 1.1HPLC法同时测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的含量 色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相：水-乙腈,梯度洗脱,0～21min80:20,21～30min80:20～75:25,30～1min75:25～59:41,41～51min59:41～55:45,51～56min55:45～80:20,56～66min80:20(体积比)：柱温：20℃；进样量：10μL；流速：1mL/min;检测波长：203nm。五种成分的线性方程分别是三七皂苷R1Y=304.60X-1.1457,人参皂苷Rgi Y=371.97X-29.646,人参皂苷ReY=391.18X-6.7571,人参皂苷Rb1Y=270.76X+1.0893,人参皂苷Rd Y=329.50X+1.3643; r=0.9997～0.9998,加样回收率为97.6～101.7%。 1.2HPLC法测定三七中三七素的含量 色谱柱：Agilent Zorbax SB-Aq (250mmx4.6mm,5μm),流动相：甲醇：0.05%冰乙酸=35：75,柱温：20℃,检测波长：213nm,流速：0.8mL/min,进样量：101μL。线性方程Y=1980.4X-83.431,r=0.9999o 比较了生三七和蒸制熟三七中三七素的含量,其中生三七中三七素含量0.59%,蒸制熟三七中三七素含量为0.29%。 2生熟三七的炮制研究 2.1三七的炮制工艺研究 考察了三七润制温度、时间,干燥温度,蒸制时间这几个因素,以润制效果、五种皂苷类成分含量为指标,最终确定三七润制温度为60℃,润制时间24-27h,干燥温度40℃,蒸制时间6h。 2.2三七加热炮制方法研究 考察了蒸制法、油炸法、砂炒法三种加热炮制方法炮制前后三七中五种皂苷类成分的含量。HPLC法测定结果为生品中三七皂苷R10.98%、人参皂苷Rgl3.27%、人参皂苷Re0.38%、人参皂苷Rbl2.72%、人参皂苷Rd0.66%；蒸制三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd含量依次为0.79%、2.69%、0.33%、2.49%、0.61%；油炸三七中此五种成分含量依次为1.09%、2.56%、0.18%、2.44%、0.57%；砂炒三七中依次为0.30%、1.15%、0.11%、1.00%、0.24%。 对三七炮制前后HPLC色谱图比较发现,三七炮制后一些成分含量减少或消失,同时生成了一些新成分,其中某些新产生成分随炮制温度升高含量增加。 3三七皂苷类成分指纹图谱研究 3.1指纹图谱的建立和方法验证 主要考察了提取方法、洗脱梯度对指纹图谱的影响。确定色谱条件为色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm);流动相：水-乙腈,梯度洗脱,0～25min80:20,25～30min80:20～75:25,30～41min75:25～59:41,41～51min59:41～55:45,51～56min55:45～80:20,56～70min,80：20(体积比)；柱温：20℃；进样量：10μL；流速：1mL/min；检测波长：203nnm。精密度实验、重复性实验、稳定性实验中10个共有峰相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于3%。 3.2不同蒸制时间炮制品指纹图谱研究 三七常压蒸制Oh、2h、4h、6h、8h,建立不同蒸制时间制品的指纹图谱,标定11个共有峰,0h、2h、4h制品指纹图谱相似度0.99,6h、8h制品相似度0.76,6h相似度低于8h。对不同时间制品指纹图谱进行聚类分析,Oh、2h、4h、8h归为一类,6h归为一类。由相似度和聚类分析结果可看出6h制品指纹图谱特征与其它蒸制时间制品差异最大,可以得出三七常压蒸制最佳时间为6h,与炮制工艺中确定的蒸制时间一致。 4生三七和蒸制熟三七部分药理作用比较研究 4.1生熟三七的止血作用比较 用断尾法和毛细玻管法测定小鼠的出血时间和凝血时间,各给药组均能显著缩短小鼠出血时间；生三七能显著缩短小鼠凝血时间,熟三七则对凝血时间有缩短趋势,但影响不显著。表明在止血作用方面,生三七好于熟三七。 4.2生熟三七的活血作用比较 高分子右旋糖酐-冰水浴建立小鼠血瘀模型,测定小鼠耳廓微循环和血液流变学指标评价生熟三七的活血作用。生三七、蒸制熟三七对微循环障碍小鼠耳廓微动脉口径影响不显著,对微静脉口径10min、20min时影响不显著,生三七高、低剂量组均能显著增加微循环障碍小鼠30min时微静脉口径、毛细血管开放量和20min时毛细血管开放量；复方丹参片组可显著降低微循环障碍小鼠的全血黏度,熟三七高剂量组有降低的趋势,但作用不显著。表明在改善微循环方面,生三七好于熟三七,熟三七组仅高剂量组有一定作用,而且起效较慢；在改善血液黏度方面,熟三七好于生三七。 4.3生熟三七的补血作用比较 建立小鼠失血性贫血模型,测定血常规指标和重要脏器(胸腺、脾脏、肾上腺)指数,评价生熟三七的补血作用。生三七、蒸制熟三七均能极显著升高失血性贫血小鼠红细胞总数、血红蛋白含量、白细胞总数,熟三七作用略好于生三七,但无显著性差异;对失血性贫血小鼠脏器重量的影响不显著。表明生三七、蒸制熟三七对失血性贫血小鼠均有显著的补血作用,熟三七作用略好于生三七,但生、熟三七比较差异无显著性。 4.4生熟三七的补虚作用比较 环磷酰胺诱导小鼠气血虚弱、免疫力低下模型,测定血常规指标和重要脏器(胸腺、脾脏、肾上腺)指数,评价生熟三七补虚作用。生三七、蒸制熟三七对环磷酰胺所致气虚小鼠红细胞总数影响不显著,熟三七高剂量组能显著增加气虚小鼠血红蛋白含量,各给药组显著增加气虚小鼠白细胞总数(尤以复方阿胶浆组和熟三七高剂量组作用更显著)；与模型组比较,熟三七高、低剂量组各脏器指数均极显著升高,生三七高、低剂量组有升高的趋势,但作用不显著。表明在提高免疫、补气作用方面熟三七好于生三七。

【关键词】：
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R283
【目录】：

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