足三里和阿是穴在电针促进神经肌肉接头再生中的作用及其机制研究

发布时间：2018-04-04 13:27

  本文选题：阿是穴　切入点：电针　出处：《北京中医药大学》2016年博士论文

【摘要】：骨骼肌损伤约肌肉骨骼系统损伤占60-67%,其中最常见的损伤类型是钝挫伤,严重影响人们正常生活质量。骨骼肌损伤后随着肌卫星细胞的激活、增殖、迁移以及分化,多数骨骼肌损伤都能得到不同程度的修复。然而骨骼肌损伤并不能达到完全再生,除了因为成纤维细胞增生导致的过度纤维化之外,就是再生的骨骼肌不能得到神经再支配,导致肌肉功能不能完全恢复。失神经支配不但使卫星细胞的功能下降、血管床构造异常、诱发细胞凋亡,还能影响与骨骼肌再生相关的调控因子的功能,从而导致骨骼肌萎缩等不能形成有效的再生,失神经支配的骨骼肌无论是在肌纤维的数量、体积还是功能上都有明显异常,因此对于骨骼肌损伤的有效治疗都应立足于最终恢复神经支配。再生肌肉神经系统的功能恢复最终要依赖神经肌肉接头(Neuromuscular junction, NMJ)的再生与重建,因此NMJ的功能状态常作为反映骨骼肌的生理功能的重要指标。我们前期的实验结果发现,同时电针足三里和阿是穴能够有效改善钝器伤骨骼肌微循环灌注、激发线粒体和肌质网的功能状态和促进肌原纤维结构恢复,还可以促进骨骼肌损伤后骨骼肌表面肌电图、神经传导速度等骨骼肌功能指标的恢复,而这种修复很可能与NMJ的重建有关,然而有关电针对NMJ的修复重建的影响尚不清楚。另外,根据中医理论中不同穴位功能主治的特异性,要求我们根据了解各穴位在促进骨骼肌修复中的作用特点以优化治疗方案。有鉴于此,我们设计了本实验。目的探究电针足三里穴、电针阿是穴在骨骼肌损伤后再生中,促进NMJ重建的作用特点及其机制,从而为优化骨骼肌损伤的电针治疗方案提供实验室依据。方法75只新西兰大白兔随机平均分成5组：正常组、模型组、电针阿是穴、电针足三里组、电针足三里加阿是穴组(合用组)。采用急性腓肠肌钝器伤模型,电针各组进行穴位电刺激(0.4 mA,2 Hz,15 min),正常组和模型组仅模拟电针各组进行固定。每组分别于造模后第7天、14天、28天随机取5只大白兔使用耳缘静脉空气栓塞法处死,取造模打击部位腓肠肌样本,通过HE染色观察骨骼肌肌纤维形态(直径和数量)、免疫荧光染色观察NMJ形态(NMJ平均染色面积和非连续性),免疫组化检测肌细胞生成素(Myogenin)的表达情况,ELISA法测AChE的表达；并使用QRT-PCR和ELISA方法检测肌特异性蛋白激酶(Muscle specific protein kinase, MuSK)以及神经调节蛋白1(Neuregulinl, NRG1)的基因和蛋白表达情况。结果与模型组比较：合用组新生肌纤维数量和直径,NMJ的平均染色面积增加,但是NMJ的非连续性下降,同时AChE、Myogenin、MuSK以及NRGl的表达增加,差异具有统计学意义(P0.05)；电针足三里组与电针阿是穴组相互比较：7天时,电针阿是穴组肌纤维直径、NMJ平均染色面积、AChE的蛋白含量、NRG1的mRNA和NRG1蛋白含量、Myogenin的平均光密度值(Mean optical density, MOD)等参数均较电针足三里组高,差异具有统计学意义(P0.05)；而肌纤维数量、NMJ非连续性、AChE的蛋白含量、MuSK的mRNA和蛋白含量等参数二者无统计学差异(P0.05)。14天时,电针阿是穴组的肌纤维直径、NMJ平均染色面积、NMJ非连续性、NRG1的mRNA和蛋白含量等参数均较电针足三里组高,差异具有统计学意义(P0.05),而电针足三里组的肌纤维数量、MuSK的mRNA和蛋白含量等参数较电针阿是穴组高,差异具有统计学意义(P0.05),但是AChE的蛋白含量、Myogenin的MOD值二组无统计学差异(P0.05)。28天时,电针阿是穴组的肌纤维直径和NMJ非连续性较电针足三里组高,差异具有统计学意义(P0.05)；而电针足三里组的肌纤维数量、AChE的蛋白含量、MuSK的mRNA和蛋白含量、Myogenin的MOD值等参数较电针阿是穴组高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论电针阿是穴、电针足三里以及同时电针足三里和阿是穴治疗骨骼肌急性钝挫伤可以促进受损肌纤维及其中NMJ的再生,电针治疗主要通过促进AChE、Myogenin、MuSK以及NRG1的表达促进骨骼肌及其中NMJ的结构重建。电针阿是穴起效较快,早期效果好；而电针足三里穴则发挥作用滞后,长期治疗效果好。两穴配伍治疗效果更佳。
[Abstract]:Objective To study the effects of acupuncture points on the regeneration and regeneration of skeletal muscle and to improve the function of skeletal muscle . In 28 days , five rabbits were sacrificed by ear - edge vein air embolism . The specimens of muscle fibers of skeletal muscle were observed by HE staining . The morphology of skeletal muscle fibers ( diameter and quantity ) was observed by HE staining , the morphology of NMJ was observed by immunofluorescence staining ( NMJ average staining area and non - continuity ) , and the expression of Myogenin was detected by immunohistochemistry .
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本文编号：1710149