SSCP和微型条形码的威灵仙分子鉴定研究

发布时间：2016-11-22 23:07

  本文关键词：电子鼻在苍术质量评价中的应用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《北京中医药大学》 2013年

基于PCR-SSCP和微型条形码的威灵仙分子鉴定研究

安蕊  

【摘要】：威灵仙为我国常用药材,其来源为毛茛科Ranunculaceae植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck.、棉团铁线莲Clematis hexapetala Pall.和东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根及根茎。一直以来,中药材便存在以伪乱真、同名异物等现象。根据研究报道及市场品种调查显示,威灵仙药用品种非常复杂,混伪品在基原、药性等方面,均与正品有差异,这无疑会扰乱正常的药材市场及临床应用。因此,威灵仙药材的准确鉴定、品种整理及质量控制是亟待解决的问题。 中药鉴定是中药研究领域的重要一方面。传统鉴定主要包括性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等方法。随着分子技术的不断发展,DNA条形码鉴定方法在药材鉴定中发挥了很大作用。此方法操作步骤简便,可以稳定、高效、准确的完成鉴定工作,受到了中药鉴定工作者广泛的关注。微型条形码是根据更短的片段进行物种的鉴定,其主要依据是物种间DNA的稳定碱基差异,用于鉴定DNA发生严重降解的实验材料。本研究还在此基础上,采用PCR-SSCP-PAGE的方法鉴定了威灵仙药材及其基原植物。 本研究选取威灵仙三种基原植物及市售药材为研究对象,利用微型DNA条形码技术和PCR-SSCP技术加以鉴定,以达到对药材市场中威灵仙品种整理,为威灵仙质量控制提供依据的目的。 经过研究,所得结果如下： (1)根据威灵仙三种基原的特异位点,采用PCR扩增技术,建立了微型条形码的鉴别方法。结果表明,设计的引物能够将DNA质量较差样本中的目的片段扩增出来,片段长度200bp左右,且测序成功率100%,短小的片段也便于序列的分析；对药材的鉴别能够准确、快速的完成。 (2)本研究在传统鉴定的基础上,采用PCR-SSCP-PAGE技术,建立鉴别威灵仙药材的方法体系。本研究中,PCR-SSCP-PAGE能够将威灵仙的三种基原植物鉴别开,但对于威灵仙药材,其鉴别效果欠佳。但PCR-SSCP技术具有高通量、灵敏、经济等优点,且此技术在药材鉴别领域应用较少,还应当多次尝试其他药材,具有很大发展前景。 (3)通过对威灵仙药材的性状鉴定和显微鉴定,了解到目前威灵仙商品药材主要来源于威灵仙和东北铁线莲。结合此批药材含量测定结果发现威灵仙、东北铁线莲和棉团铁线莲的齐墩果酸和常春藤皂苷含量差异较大。威灵仙药材中,此两种成分均能达到药典的要求,因此建议在选择药材种类时,选择威灵仙入药。而棉团铁线莲药材中检测不到此两种成分。另外,东北铁线莲中常春藤皂苷含量极微或无法检出。因此,建议在药材栽培中选择威灵仙为主要栽培品种。 (4)建议将威灵仙、东北铁线莲、棉团铁线莲在齐墩果酸和常春藤皂苷含量方面,分别规制,以利于对药材质量控制和监管。

【关键词】：
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R284
【目录】：

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