基于上皮间质转化现象对益气活血方抗大鼠肝纤维化疗效及分子机制的研究

发布时间：2016-11-30 20:21

  本文关键词：基于上皮间质转化现象对益气活血方抗大鼠肝纤维化疗效及分子机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《中国中医科学院》 2013年

基于上皮间质转化现象对益气活血方抗大鼠肝纤维化疗效及分子机制的研究

李川  

【摘要】：背景：肝纤维化(Hepatic fibrosis, HF)是指肝脏中细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)尤其是胶原的过量沉积。它不是一个独立的疾病,而是各种病因所致的慢性肝病的共同病理过程,是发展到肝硬化必经阶段,并与肝癌有关。因此抗纤维化治疗对肝硬化及肝癌的防治、延缓疾病进程、减少患者痛苦及疾病支出具有重要临床意义。近年来的研究表明：肝星状细胞活化、肝窦毛细血管化、上皮间质转化均参与了肝纤维化的进程,其中对上皮间质转化参与肝纤维化的研究相对较少,所以进一步研究影响上皮间质转化这一病理生理现象的调控因素,可为肝纤维化的治疗提供新的途径。目前西医尚无特别有效的抗肝纤维化药物,而中医药在防治肝纤维化方面进行了大量的实验和临床研究,显示出较好的疗效和优势。益气活血方(黄芪、莪术、九香虫、桃仁)是孙桂芝教授在总结多年临床经验的基础上提炼出来的治疗肝纤维化肝硬化的小验方。经本人导师吕文良主任和广安门医院肝炎门诊的其他专家大量临床观察验证,益气活血方的确有显著的抗肝纤维化疗效。 目的：通过观察益气活血方对大鼠肝纤维化的影响,研究其抗肝纤维化的疗效；验证肝纤维化进程中存在上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)现象且转化生长因子-β(Transforming growth factor-β, TGF-β)/转化生长因子-βⅡ型受体(Transforming growth factor-β receptor Ⅱ, TGF βRⅡ)/Smads信号通路参与了EMT,为EMT参与HF提供实验室依据；探讨益气活血方抗肝纤维化的分子机制,以便更好的运用于临床,也为挖掘传承名老中医经验的科学内涵提供新的研究思路。 方法：采用四氯化碳和乙醇复合因素复制大鼠肝纤维化模型,从第5周起,造模的同时开始给予药物干预,药物干预12周后采取大鼠血清、肝脏、脾脏。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase, AST)、白蛋白(Albumin, ALB)含量。记录肝脏、脾脏重量并计算肝指数、脾指数。取各组大鼠肝脏的相同部位进行病理切片HE染色,光镜下观察各组大鼠病理结果,并进行纤维化分级。免疫组化法检测肝组织中E-钙粘素(Epithelial Ca2+dependent cell adhesion molecules, E-cadherin)、TGF-β1、TGFβRⅡ、Smad2,并应用Axio Vision Release4.8.2图像分析软件测量各指标的阳性表达面积总值和阳性面积百分比。 结果：经四氯化碳和乙醇造模后,模型组大鼠的肝湿重、脾湿重、肝指数、脾指数均升高,与空白对照组的差异有统计学意义(P0.05)；给予益气活血方治疗后大鼠的肝湿重、脾湿重、肝指数、脾指数下降,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组ALT、AST升高,ALB降低,与空白对照组的差异有统计学意义(P0.05)；给予益气活血方治疗后大鼠的ALT、AST水平降低,ALB升高,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。HE染色结果显示,空白对照组大鼠肝脏纤维化程度全部处于sO期,模型组主要集中在s4期,二者的差异有显著的统计学意义(P0.01)：益气活血组主要分布在Sl-S3期,与模型组的差异有显著的统计学意义(P0.01)。免疫组化结果显示,模型组大鼠肝组织中E-cadherin表达下调,TGF-β1、TGF βRⅡ、Smad2的表达上调,与空白对照组的差异有统计学意义(P0.05)；益气活血组E-cadherin表达较模型组提高,TGF-β1、TGFβRⅡ、Smad2的表达较模型组降低,二者的差异有统计学意义(P0.05)。 结论：益气活血方能降低肝纤维化大鼠肝湿重、脾湿重、肝指数、脾指数,并能降低ALT、AST,提高ALB水平,从而改善肝纤维化大鼠肝脾形态及肝功能。从病理上来看,益气活血方能改善肝脏炎症程度,减少细胞外基质的沉积,促使肝纤维化逆转,具有很好的抗肝纤维化疗效。上皮间质转化参与了大鼠肝纤维化的发展进程,模型组E-cadherin表达的下降是其参与纤维化的证据。益气活血方能上调E-cadherin的表达,提示其可以逆转EMT,从而逆转肝纤维化。益气活血方能通过下调TGF-β1、TGFβRⅡ、Smad2的表达阻断TGF-β/TGFβRⅡ/Smads通路,从而阻断肝纤维化进程。鉴于TGF-β/TGFβRⅡ/Smads通路是EMT的主要通路之一,而我们的研究发现益气活血方既可以逆转EMT,又可以阻断TGF-β/TGFβRⅡ/Smads通路,因此我们认为益气活血方可能是通过阻断TGF-β/TGFβRⅡ/Smads通路,从而逆转EMT实现抗肝纤维化功效。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R259
【目录】：

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