巴西莓对酒精性肝损伤的保护作用及机制研究
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《北京中医药大学》 2014年
巴西莓对酒精性肝损伤的保护作用及机制研究
屈胜胜
【摘要】:巴西莓又名阿萨伊(Acai),是南美洲地区常用草药,来源于棕榈科植物阿萨伊棕榈树Euterpe Oleraceae Mart.的新鲜果实,近年来在世界范围内引起广泛关注,2013年卫生部批准巴西莓(阿萨伊)进入我国作为新资源食品使用。本论文根据查阅的巴西莓最新研究进展,对巴西莓的化学及营养成分,生物活性进行综述。巴西莓富含花青素,原花青素,黄酮,植物甾醇等成分,其活性主要为抗氧化,抗炎,调节降脂等作用。巴西莓是南美洲常用草药或药食两用资源,有很高的经济价值和巨大的开发前景。 随着人民的生活水平不断提高,酒精消费人群在我国逐年升高,酒精中毒造成的神经及消化系统损害也与日俱增。酒精性肝损伤是因长期大量饮酒而引起的肝脏损害,主要包括酒精性脂肪肝,酒精性肝炎,酒精性肝纤维化,酒精性肝硬化,这几种病理形式可以单独存在也可以两种或多种相兼存在。对于酒精性肝损伤的治疗,国内外都进行了大量的临床及实验研究,但是只局限于几个方面,也缺少安全有效的药物。如何能利用世界各种植物资源开发解酒保肝的药物及保健品受到医药及食品行业的广泛关注。 中医认为酒精性肝损伤为气、血、痰、湿相互搏结,治法多在辨病与辨证相结合下分期论治,前期多采用清热化湿、疏肝理气,中期多疏肝理脾、清热化痰、活血化瘀,后期多采用祛邪扶正、理气破瘀、软坚利水。用药多采用行气药,活血药,解毒药及扶正药配伍。 本研究旨在通过对巴西莓解酒保肝的功效进行实验研究及机理探讨,结合巴西莓已有的科学文献,运用中医传统哲学思维,对巴西莓的药性进行归纳总结,以发挥临床中药学学科的特色和优势,丰富学科的研究内容,为学科的发展做贡献。 1巴西莓对酒精中毒小鼠保护作用 1.1巴西莓对急性酒精中毒小鼠反正反射影响 目的:研究巴西莓对醉酒小鼠醉酒潜伏期及醒酒时间影响。方法:ICR雄性小鼠随机均分成5组,模型组,盐酸纳洛酮组,巴西莓(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg)三个剂量组。实验前12小时禁食不禁水模型组按0.1ml/10g灌胃给予生理盐水,巴西莓组按0.1ml/10g灌胃给予不同浓度巴西莓(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg),30分钟后,模型组与巴西莓组小鼠按0.15ml/10g分别灌胃给予50%乙醇。观察小鼠活动状况,以翻正反射消失时间为醉酒潜伏期,翻正反射恢复时间为醒酒时间。结果:与模型组相比,巴西莓组醉酒潜伏期延长,与模型组相比,巴西莓的醒酒时间有所缩短。结论:巴西莓可能具有一定的解酒作用。 1.2巴西莓对急性酒精中毒小鼠自主活动影响 目的:研究巴西莓对酒精中毒兴奋期小鼠影响。方法:ICR雄性小鼠,随机均分为5组,空白组,模型组,巴西莓(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg)三个剂量组。实验前12小时禁食不禁水。实验前可先将动物放在自主活动仪内适应一段时间,使其熟悉测定环境,保证实验数据的准确性。实验时,空白对照组灌胃生理盐水0.15ml/10g,巴西莓组按0.1ml/10g分别给予不同浓度巴西莓(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg),模型组给予等量生理盐水。30分钟后,模型组与巴西莓组小鼠分别灌胃给予30%乙醇0.15ml/10g。灌酒后小鼠在自主活动仪内适应10min,记录后5min小鼠的自主活动次数。各组动物交替进行试验,避免时间差对动物自主活动产生的影响。结果:模型组的自主活动数均明显于高于空白组(P0.05),与模型组相比,巴西莓低、中、高剂量组的自主活动数均降低,1.6g/kg组自主活动数明显降低(P0.05)。结论:巴西莓对醉酒兴奋期小鼠具有一定的抑制作用。 1.3巴西莓对急性酒精中毒小鼠运动协调性影响 目的:研究巴西莓对醉酒小鼠运动协调性影响。方法:ICR雄性小鼠,随机均分为5组。空白组,模型组,巴西莓(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg)三个剂量组。实验前24小时分别进行训练,使动物在3min内基本可以在倾斜平板自由爬行,不摔落。实验前12小时禁食不禁水。实验时,空白对照组灌胃生理盐水0.25ml/10g,巴西莓组按0.1ml/10g分别给予不同浓度巴西莓(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg),模型组给予等量生理盐水。30分钟后,模型组与巴西莓组小鼠分别灌胃30%乙醇0.15ml/10g。给酒后10min开始测定,记录3min内小鼠倾斜平板跌落的次数,即平衡失误次数。结果:模型组的平衡失误次数均明显高于空白组(P0.05),与模型组相比,巴西莓高剂量组的平衡失误次数明显降低(P0.05)。结论:巴西莓对醉酒导致的共济失调具有一定的改善作用。 1.4巴西莓对酒精中毒小鼠学习记忆影响 目的:探讨巴西莓对酒精中毒小鼠学习记忆影响。方法:ICR雄性小鼠,随机均分为5组,空白组,模型组,巴西莓(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg)三个剂量组。实验前24h分别进行训练,先在跳台仪内适应3min然后以36V电压通电5min,动物受到电击时,其正常反应是跳回跳台(橡皮垫)以躲避电击,从而获得记忆;小鼠双足同时接触铜栅为触电,视为错误反应。实验前12小时禁食不禁水。实验时,空白对照组灌胃生理盐水0.25ml/10g,巴西莓组按(0.4g/kg,0.8g/kg,1.6g/kg),模型组给予等量生理盐水。30分钟后,模型组与巴西莓组小鼠分别灌胃30%乙醇0.15ml/10g。给酒后10min开始测定,记录5min内小鼠的触电次数及反应时间。结果:模型组的反应时间及触电次数明显高于空白组(P0.05),与模型组相比,巴西莓0.4g/kg组、0.8g/kg组、1.6g/kg组反应时间有所加快,巴西莓1.6g/kg组的触电次数明显降低(P0.05)。结论:巴西莓对急性酒精中毒导致的记忆障碍具有一定的改善作用。 1.5巴西莓对急性酒精中毒小鼠血液中乙醇浓度影响 目的:研究巴西莓对急性酒精中毒小鼠血液中乙醇浓度。方法:ICR雄性小鼠,随机均分成5组,其中一组作为空白对照组,实验前12小时禁食不禁水。实验时,空白对照组按0.25ml/10g给予生理盐水,每组中巴西莓组按0.1ml/10g分别给予不同浓度巴西莓提取物,模型组给予等量生理盐水。30分钟后,模型组与巴西莓组分别灌酒0.15ml/10g。在灌酒后1h后取血,在取血同时另取小鼠左肝叶边缘肝脏组织备用(大约2×2×2mm3)。空白对照组小鼠只摘取肝脏组织备用。气相色谱法分析血清中乙醇浓度。结果:与模型组相比,巴西莓0.4g/kg组、0.8g/kg组、1.6g/kg血清乙醇浓度有所降低,结果没有统计学意义。结论:巴西莓对急性酒精中毒小鼠血液中乙醇浓度没有影响。 1.6巴西莓对急性酒精中毒小鼠肝脏乙醇脱氢酶活性影响 目的:研究巴西莓对急性酒精中毒小鼠乙醇代谢影响。方法:动物分组及处理情况见实验五。取实验五肝脏,用生理盐水将取出的肝脏冲洗3次,滤纸吸净后称重,按1:9加预冷生理盐水,在冰浴中用玻璃匀浆器制备10%匀浆,3000rpm低温离心匀浆液10分钟,上清液备检测。按试剂盒方法检测乙醇脱氢酶活性。结果:与空白组相比,模型组的乙醇脱氢酶活性有所升高,与模型组相比,巴西莓0.4g/kg组0.8g/kg组1.6g/kg组有所升高。结论:巴西莓对急性酒精中毒小鼠乙醇代谢没有影响。 1.7巴西莓对急性酒精性肝损伤小鼠的保护作用 目的:研究巴西莓的保肝作用。方法:急性酒精性肝损伤实验:小鼠按0.12ml/10g灌胃50%乙醇,建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,观察巴西莓对小鼠肝细胞膜通透性,肝脏脂质过氧化反应等的影响。结果:巴西莓可以延长醉酒潜伏期(P0.05),缩短醉酒动物睡眠时间,且可降低血清ALT、AST(P0.01),升高肝脏GSH(P0.05)、SOD水平,降低肝脏MDA、TG含量(P0.05),对酒精造成的脂肪性病变具有一定的改善作用。结论:巴西莓可以维护肝细胞膜稳定性,提高抗氧化能力,降低脂质过氧化,对急性酒精性肝损伤具有一定的保护作用。 2巴西莓对急性酒精性肝损伤大鼠的保护作用 目的:研究巴西莓的保肝作用。方法:各组大鼠按0.4g/kg,0.8g/kg,1.6/kg灌胃巴西莓,除正常对照组外,其他各组动物给药后1h给予50%(V/V)酒精14ml/kg,正常对照组给予双蒸水,连续10天,建立大鼠急性酒精性肝损伤模型,观察巴西莓冻干粉对大鼠急性酒精性肝损伤肝细胞膜通透性,肝脏脂质过氧化反应、肝细胞脂肪变性等的影响。结果:巴西莓可以降低血清ALT(P0.01)、AST(P0.01),升高肝脏GSH(P0.05)、SOD水平,降低肝脏MDA(P0.05)、TG含量(P0.05),对酒精造成的脂肪性病变具有一定的改善作用。结论:巴西莓可以维护肝细胞膜稳定性,提高抗氧化能力,降低脂质过氧化,对急性酒精性肝损伤具有一定的保护作用。 3巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠的保护作用 目的:研究巴西莓的保肝作用。方法Wistar大鼠适应性喂养一周后随机分为空白组,模型组,东宝肝泰组,巴西莓1.6g/kg,0.8g/kg,0.4g/kg三个剂量组,除空白组给蒸馏水外,其余各组均用56%白酒(二锅头)灌胃,用量为第一周0.8ml/100g,以后每周增加0.1ml(直至增加为1.5ml/100g),连续灌胃8周,建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型,观察巴西莓冻干粉对大鼠慢性酒精性肝损伤肝细胞膜通透性,肝脏脂质过氧化反应、肝细胞病理改变等影响。结果:巴西莓可以降低血清ALT、AST(P0.05),升高肝脏GSH、SOD(P0.05)水平,降低肝脏MDA(P0.05)、TG含量(P0.05)。病理切片观察表明模型组肝脏以脂肪变性为主,部分肝脏可见肝细胞点状坏死,炎性细胞浸润,阳性药及巴西莓各剂量对大鼠肝脏病理改变有不同程度的改善作用。结论:巴西莓可以维护肝细胞膜稳定性,提高抗氧化能力,降低脂质过氧化,对慢性酒精性肝损伤具有一定的保护作用。 4巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠保护作用机理研究 4.1巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠血清TNF-α、TGF-β1、IL-6、IL-8的影响 目的:研究巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠保护作用及免疫、炎症机制。方法:造模方法同上,八周末最后一次给酒后,禁食不禁水12h,水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,低温分离血清,放免法检测血清中TNF-α、TGF-β1、IL-6、IL-8含量。结果:模型组的TNF-α明显高于空白组(P0.01),具有统计学意义,与模型组相比1.6g/kg、0.8g/kg巴西莓TNF-a明显降低(P0.01,P0.05)。模型组的TGF-β明显高于空白组(P0.01),具有统计学意义,与模型组相比1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg巴西莓TGF-β明显降低(P0.01,P0.05,P0.01)。模型组的IL-6明显高于空白组(P0.05),与模型组相比1.6g/kg巴西莓IL-6具有明显降低(P0.05)。模型组的IL-8明显高于空白组(P0.05),与模型组相比1.6g/kg巴西莓IL-8具有明显降低(P0.01)。结论:巴西莓可显著降低慢性肝损伤大鼠血清IL-8,TNF-α含量,从而减轻产生多种炎性介质的激活效应,进而抑制炎症的发生,还可降低IL-6,抑制肝细胞胶原分泌,从而抑制酒精性肝损伤的加重,又可降低血清TGF-β1,抑制肝损伤的进一步加重,从而发挥对肝脏的保护作用。 4.2巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏CD68蛋白表达的影响 目的:研究巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠枯否细胞活化影响。方法:造模方法同上,末次给酒精后禁食12h麻醉状态下取血,分离血清;取血后迅速剖取肝脏,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片,免疫组化法检测大鼠肝脏CD68表达。结果:模型组大鼠肝组织CD68蛋白表达明显升高,与空白组相比具有统计学差异。与模型组相比巴西莓各剂量肝脏肝组织CD68蛋白表达均有一定程度的降低,1.6g/kg,0.8g/kg,0.4g/kg巴西莓大鼠肝脏CD68蛋白表达与模型组相比具有统计学差异(P0.01)。结论:巴西莓保肝作用机制可能与降低CD68表达,抑制枯否细胞活化有关。 4.3巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏NRF-2、NF-κB、TGF-β1、CD68的nRNA表达的影响 目的:研究慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏NRF-2、NF-κB、TGF-β1、CD68mRNA表达的影响。方法:造模方法同上。取100mg大鼠肝组织,RT-PCR法分析大鼠肝脏核因子相关因子-2(Nrf-2),核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和CD-68基因的表达水平。结果:模型组大鼠肝组织Nrf-2mRNA表达与空白组相比明显降低(P0.01),与模型组相比巴西莓各剂量肝组织Nrf-2均有一定程度的升高,1.6g/kg巴西莓大鼠肝组织Nrf-2与模型组相比具有统计学差异(P0.05)。模型组大鼠肝组织NF-κBmRNA表达明显升高,与空白组相比具有统计学差异(P0.01),与模型组相比巴西莓各剂量肝组织NF-κB均有一定程度的降低,1.6g/kg,0.8g/kg、0.4g/kg巴西莓大鼠肝脏NF-κB与模型组相比明显降低,具有统计学差异(P0.01,P0.05,P0.05)。模型组肝脏TGF-β1mRNA表达均明显高于空白组(P0.01),巴西莓各剂量肝脏TGF-β1mRNA与模型组相比均有一定程度的降低,与模型组相比1.6g/kg、0.8g/kg巴西莓肝脏TGF-β1含量及肝脏mRNA表达与模型组相比明显降低(P0.05)。模型组大鼠肝组织CD68mRNA表达明显升高,与空白组相比具有统计学差异。与模型组相比巴西莓各剂量肝脏肝组织CD68mRNA表达有一定程度的降低,1.6g/kg,0.8g.kg,0.4g/kg巴西莓大鼠肝脏mRNA表达与模型组相比具有统计学差异(P0.01)。结论:巴西莓可显著抑制CD68mRNA表达,降低枯否细胞的活化,下调NF-κBmRNA表达,抑制炎症的发生,减少炎性细胞对肝脏的攻击;下调肝脏TGF-β1mRNA表达,抑制肝损伤的进一步加重。此外巴西莓又可上调Nrf-2的表达,从而激活下游抗氧化通路,发挥对肝脏的保护作用。 4.4巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠海马5-HT含量的影响 目的:研究巴西莓对慢性酒精性肝损伤大鼠海马单胺神经递质影响。方法:造模方法同上,于第8周末,所有动物末次给酒后,禁食不禁水12h,10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血后,剥离大鼠大脑,分离海马,液氮冻存,放免法检测海马5-HT含量。结果:模型组大鼠海马5-HT含量明显降低,与空白组相比具有统计学差异。与模型组相比巴西莓各剂量海马5-HT含量均有一定程度的升高,1.6g/kg,0.8g/kg,0.4g/kg巴西莓大鼠海马5-HT含量与模型组相比具有统计学差异(P0.05)。结论:巴西莓可提高慢性酒精性肝损伤大鼠海马5-HT含量,改善酒精对学习记忆功能的损伤。 通过巴西莓对醉酒小鼠行为学、急性小鼠、大鼠酒精性肝损伤模型,大鼠慢性酒精性肝损伤模型的研究表明:巴西莓具有解酒及保肝作用,其机制可能与提高自身抗氧化能力,抑制炎症发生发展.调节中枢神经递质有关。 5巴西莓药性探讨 根据巴西莓已有的科学文献及我们的实验研究,对巴西莓采用中医传统哲学思维,结合现代科学的方法,对其药性进行归纳总结。 5.1巴西莓的性(气)药性的寒热温凉是由药物作用与人体所产生的不同反应和所获得的不同疗效总结出来的,与所治疗疾病的性质是相对而言。巴西莓中主要含有花青素、原花青素、黄酮、糖类、氨基酸等物质,是当地一种主要食物来源。具有抗氧化、免疫调节、抗炎活性。高血脂、高血糖(消渴),多属气阴两虚,有热象表现居多,而酒精性肝损伤多为湿热蕴结。由于巴西莓对此类病症具有一定的治疗和保健作用,又巴西莓传统上是一种食物来源,大多数食物的性味都是比较平和的,综合考虑,推断巴西莓性凉。 5.2巴西莓的味味的确定首先是通过口尝,更重要的则是通过长期的临床实践观察确定。研究表明,酸味中药多具有降血脂、降血糖、保肝的功效。巴西莓口尝味酸,又具有降血脂,降血糖的功效,我们的实验研究表明巴西莓可以解酒保肝。故巴西莓味酸,具有保肝降脂,解酒毒的功效,用于高脂血症,酒毒伤中。甘味药的化学成分以糖类、蛋白质、氨基酸、苷类等机体代谢所需的营养成分为主,具有补充营养,强壮人体,增强调节机体免疫力,提高抗病能力的作用。巴西莓成分主要有花青素,原花青素,黄酮,糖类,蛋白质等物质,具有抗氧化,抗炎,免疫调节等功能,又在当地为一种传统食物食用。故巴西莓味甘,具益气养阴的功效,可用于气阴两伤之内热消渴。 5.3巴西莓的归经归经是药物作用定位的概念,即表示药物作用部位。据巴西传统医学记载,巴西莓当地居民的一种主要食物来源。根据报道,巴西莓可用于高血脂及高血糖等疾病,此类疾病均与脾失健运,津液代谢失常有关,酒精性肝损伤最初也是伤及脾胃,导致脾胃运化失常,许多具有解酒毒的中药,如葛花,枳棋子,也归脾(胃)经,由此可以推断,巴西莓可能归脾胃经。 5.2巴西莓的毒性我国新资源食品的审批经过多项安全性评价,符合食品标准,故无毒。 综上所述,暂定本品味甘酸,归脾胃经,善调和脾胃,保肝降脂,用于高血脂症。又能解酒毒,性凉而除烦止渴,用于酒毒伤中,头昏烦渴,脘腹痞满。又本品味甘能补,酸甘可益气化阴,益胃生津,用于气阴两伤之内热消渴。 回归自然的热潮使得各国竞相挖掘本民族的天然植物用于医疗保健。数百年来南美土著使用植物治疗疾病成为一种传统,而这些传统草药也越来越多的进入国际市场,是传统药物学将科研转化成生产力的成功范例。近年来我国相继引入了一些南美药食两用品种如巴西莓(阿萨伊果)、玛咖等,它们做为新资源食品合法进入我国,经过了严格的检验和审批,其安全性有充分的保证,如在我国成功引种,对繁荣我国经济具有重要意义。巴西莓在国内的研究刚刚起步,对其生物活性、种植、加工等方面的研究探讨,对巴西莓的合理应用及经济发展具有重要意义。 本研究为巴西莓在酒精性肝损伤方面的应用提供了科学依据,为巴西莓在中医药理论指导下的临床应用迈出了第一步,为巴西莓与我国中药资源结合应用奠定了理论基础。
【关键词】:
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R285.5
【目录】:
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本文关键词:巴西莓对酒精性肝损伤的保护作用及机制研究,由笔耕文化传播整理发布。
本文编号:204127
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