不同频次针刺预处理对OVA致敏气道高反应性小鼠的炎症调节作用

发布时间：2016-12-21 22:20

  本文关键词：不同灸量悬灸“大椎”穴对哮喘大鼠细胞免疫学机制的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

《广州中医药大学》 2015年

不同频次针刺预处理对OVA致敏气道高反应性小鼠的炎症调节作用

庄月容  

【摘要】：研究背景气道高反应性与气道炎症是支气管哮喘的特征性表现。在对炎症反应及气道高反应性的病理生理学研究过程中,出于伦理与研究可行性出发,研究者常需用到气道高反应性动物模型,复制出可靠稳定的气道高反应性模型是必不可少的。建立大部分气道高反应性模型,动物多接受抗原致敏与激发两个过程。激发方式有两种：滴鼻激发与雾化激发,哪种激发方式建立的气道高反应性模型更好甚少文献做相关报道。因哮喘是无法根治的疾病,大部分患者需长期服用扩支气管药及糖皮质激素,而近年来对这些药物的副作用及不良反应报道使得越来越多的医生与患者重视并接受副作用小且廉价的针刺治疗。而大量临床与动物实验表明针刺可调节机体免疫功能,缓解气道炎症反应,但目前鲜少文献对不同频次针刺治疗是否对针刺疗效产生影响方面做研究探讨。实验一：不同激发方法对OVA致敏气道高反应小鼠模型的影响目的通过两种不同激发方法建立小鼠气道高反应模型,比较激发后小鼠的症状表现,Penh,肺泡灌洗液白细胞总数,选择较优气道高反应模型。方法以6-8周balb/c雌性小鼠作为观察对象,随机分为空白组、滴鼻激发模型组和雾化激发模型组,每组8-10只。空白组只生理盐水致敏,不激发；滴鼻组与雾化组均在第4、11、18天腹腔注射50ug卵清蛋白(ovalbumin, OVA)+2mg氢氧化铝佐剂,滴鼻组在第25天麻醉后滴鼻1%0VA50ul激发,连续3天；雾化组则在同一天1%雾化0VA30min,观察OVA激发后小鼠的表现。末次激发后24h雾化乙酰甲胆碱(methach-oline, Mch)检测增强呼吸间歇(enhanced pause, Penh)。Penh检测后24h麻醉后行肺泡灌洗术(bronchoavleolar lavage, BAL)收集肺泡灌洗液,检测白细胞总数,做肺组织切片HE染色,三组间两两比较以上指标评价不同激发方式的气道高反应模型。结果(1)OVA激发后表现：雾化组小鼠雾化过程中出现挠鼻、腹式呼吸；滴鼻组小鼠滴鼻后出现腹式呼吸,尾部、嘴唇紫绀,甚至2只小鼠出现死亡。(2) Penh检测：与空白组对比,滴鼻组在低浓度6.25mg/ml开始存在统计学差异；而雾化组则在吸入12.5mg/ml时与空白组、滴鼻组产生统计学差异。 (3)白细胞总数：滴鼻组、雾化组肺泡灌洗液白细胞总数显著高于对照组且存在统计学差异；滴鼻组肺泡灌洗液白细胞总数显著高于雾化组,存在统计学差异。结论滴鼻激发建立的OVA致敏气道高反应性模型比雾化激发组相关指标更明显,但是滴鼻激发时容易导致小鼠死亡,实验初期应考虑到这一弊端,适当增加样本量。实验二：不同频次针刺预处理对OVA致敏气道高反应小鼠的炎症调节作用目的通过比较不同频次针刺预处理对OVA致敏气道高反应小鼠的Penh,肺泡灌洗液白细胞总数,肺组织病理形态,肺泡灌洗液IL-4、TNF-γ、IgE水平,评价3天针刺与7天针刺预处理对OVA致敏气道高反应小鼠的炎症调节作用,并初步探讨针刺对气道高反应的调节机制。方法以6-8周balb/c雌性小鼠为观察对象,随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、3天针刺组(C组)和7天针刺组(D组),按照实验一滴鼻组方法建立气道高反应性模型。第13天开始用装订线捆绑四肢固定各组小鼠,每次20分钟,隔天1次,共7次。针刺7天组捆绑同时开始针刺足三里(3mm)、大椎(3mm)(参照针刺治疗哮喘临床选穴规律),平补平泄,每次20min,隔天一次,共7次。C组从第21天捆绑时开始针刺足三里(3mm)、大椎(3mm),平补平泄,每次20min,隔天一次,共3次。以penh,白细胞总数、血清IgE、肺泡冠洗液中IL-4、TNF-γ指标评价针刺效果。结果(1) Penh水平：模型组与对照组、针刺A组、针刺B组雾化吸入Mch各个浓度级存在统计学差异；针刺A组与针刺B组比较,低浓度Mch(6.25与12.5mg/ml)不存在统计学差异,在高浓度级存在统计学差异； (2)肺组织病理切片：HE染色可见模型组支气管与血管周围可见明显炎症细胞浸润,针刺两组比模型组炎症细胞浸润情况稍缓解,而针刺B组嗜酸性粒子细胞浸润情况比针刺A组稍轻。 (3)白细胞总数：模型组白细胞总数最高,针刺A组次之,针刺B组又次之,空白组最少；针刺两组与模型组存在统计学差异,但针刺A组与B组不存在统计学差异。(4)与空白组比较,其余三组IL-4、IgE水平增加,IFN-γ水平下降,且均存在统计学差异(P0.05)。与模型组相比,针刺B组IL-4、IgE、IFN-γ均存在统计学差异(P0.05),针刺A组IL-4、IgE存在统计学差异(P0.05),但IFN-γ不存在统计学差异(P0.05)。结论3天针刺组与7天针刺组均能缓解小鼠气道高反应,但7天针刺组预处理治疗OVA致敏气道高反应小鼠总体效果优于3天针刺组。

【关键词】：
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R245
【目录】：

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本文编号：222651