辨证使用骨蚀宁胶囊Ⅰ号、Ⅱ号对激素性股骨头坏死家兔模型CD34、CYR61、CTGF表达的影响及组织学观察

发布时间：2018-11-12 11:25

【摘要】：实验目的利用能够造成股骨头坏死的药物,通过给家兔成功造模后,然后灌服骨蚀宁胶囊Ⅰ号、Ⅱ号治疗期间,观察股骨头血管CD34、CYR61及CTGF表达的影响和股骨头组织破坏及修复情况。为验证骨蚀宁胶囊之所以有效于临床,治疗激素性股骨头坏死治疗提供数据资料。实验方法1通过动物实验,检测运用骨蚀宁药物后家兔模型的股骨头CD34、CYR61及CTGF表达的改变情况本实验使用60只健康新西兰白兔,均为成年,雌雄各半,被随机的分配为4个组:正常组6只,骨蚀宁胶囊组(治疗组)18只、空白对照组(模型组)18只、健骨生组(阳性组)18只,并给以编号。以正常组6只作为对比的标准,且每个兔子分开放在单个笼里喂养,剩余的54只兔子用来造模,通过相关造模药物应用,使其变成相对典型的SANFH模型,待股骨头坏死造模成功过后,将对骨蚀宁胶囊组(治疗组)进行甘油三酯(TG)检测用以中医辨证,鉴于甘油三酯(TG)正常值为:1.00±0.72mmol/L,检测结果按1.00mmol/L作为标准,高于此数值辨证为血瘀型,灌服骨蚀宁Ⅰ号方;剩余辨证为肾虚型,灌服骨蚀宁Ⅱ号方,健骨生组(阳性组)采用健骨生丸蒸馏水溶解后定期灌胃,对于空白对照组(模型组)将定时定量为其灌服生理盐水,于第4周、8周、12周时,将分批次处死家兔,切开取出家兔的双侧股骨头,经处理后用石蜡包埋,制作成股骨头组织切片,并运用免疫组化法(SABC)观察股骨头的CD34、CYR61及CTGF表达的情况。2从组织形态学角度观察股骨头坏死家兔模型,灌服骨蚀宁胶囊后的股骨头改变情况第4周、8周、12周分批次处死的家兔,切开双侧的髋关节并取出股骨头,经处理后用石蜡包埋,制作成股骨头组织切片,运用HE染色,在显微镜下观察股骨头组织形态的变化。实验结果1 CD34、CYR61及CTGF表达测定第4周:模型组、阳性组和治疗组的CD34、CYR61及CTGF灰度值均低于正常组(P0.01),治疗组和阳性组的灰度值都低于模型组的灰度值(P0.01);第8周:治疗组和阳性组的灰度值此时仍低于模型组的灰度值,治疗组的灰度值与阳性组灰度值比较,治疗组偏低些;第12周:正常组和阳性组的灰度值均高于治疗组(P0.01),治疗组股骨头的CD34、CYR61及CTGF的表达高于正常组和阳性组的表达(P0.01)。2 HE染色观察4周时正常组股骨头经观察其内骨小梁结构完整,形态均匀。模型组、治疗组与阳性组股骨头内的骨小梁与正常股骨头相比,结构显得不规整、不均匀,而且骨髓脂肪细胞较正常股骨头增多。8周时可见模型组股骨头内的骨小梁变细,间距增大,股骨头骨髓脂肪细胞明显增多;骨陷窝数量也较前明显增多,而治疗组和阳性组股骨头骨小梁结构比模型组有所改善。12周时股骨头切片示正常组骨小梁结构形态完整,模型组微结构无明显改变,治疗组与阳性组骨小梁结构变得较有规则,可见较多的骨髓内造血细胞,骨陷窝数量及脂肪细胞较前减少,总的看来治疗组股骨头骨小梁的整体均匀度要高于阳性组。实验结论1.大肠杆菌内毒素与甲强龙联合法可完成对兔SANFH模型构建。2.骨蚀宁胶囊均能够增强CD34、CYR61及CTGF表达,有利于坏死股骨头内血管重建与再生,使骨坏死区的血运得到改善,使骨坏死得到不同程度的修复,可能是此药对股骨头坏死起效的作用机制一个重要方面。3.激素性坏死股骨头内血管重建与再生的改变,对股骨头修复具有重要意义。
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【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R274.9

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