新疆一枝蒿水溶性多糖的研究
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【摘要】:新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)为菊科(Compositae)蒿属(ArtemisiaL.)植物,多年生草本。主要分布在新疆阿尔泰山、天山和昆仑山等地区,欧洲亦有分布。新疆一枝蒿全草是维吾尔族常用药材,维吾尔语称为“一孜乎艾曼尼”,具有驱风活血、健胃消食等多重功效。综合目前国内外有关新疆一枝蒿研究的文献,发现其研究主要集中在黄酮类物质、倍半萜类、生物碱类等。对新疆一枝蒿多糖的研究主要在粗多糖的提取及抗氧化活性等方面,有关其分离纯化及结构鉴定的研究较少,而多糖具有多种生物活性,可能在新疆一枝蒿的药效方面发挥着独特的作用。因此,本实验对新疆一枝蒿多糖进行更加深入的探索研究。利用超声波辅助水提法提取新疆一枝蒿粗多糖(YZHc),并应用响应面法优化提取工艺,结果显示,新疆一枝蒿粗糖最佳提取条件为:液料比30:1(mL:g)、提取温度72℃、提取时间2.5 h、超声波功率350W。此条件下YZHc的得率为3.11%,与理论预测值基本一致。测定YZHc的理化性质,对YZHc进行酶法-sevage法联合脱蛋白、H202脱色后得到初步纯化多糖(YZHp),经酸性乙醇分级得级分YZH1、YZH2、YZH3、YZH4、YZH5。经DEAE SephadexA-25对级分四(YZH4)进行柱层析纯化,得到一枝蒿多糖(YZH4b),经高效液相色谱(HPLC)检测,得到单一狭窄对称峰,纸层析检测为单一斑点,说明所获得的多糖YZH4b是分子量与极性都均一的多糖,测得YZH4b的分子量约为9333。气相色谱(GC)分析结果表明YZH4b的单糖组成为鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal),相对摩尔比为1.0:14.7:2.4:7.2:19.6:33.2。通过红外(IR)、核磁(NMR)、甲基化、GC-MS等方法对YZH4b的结构进行分析。结果表明Gal以1→4糖苷键连接构成多糖YZH4b的主链之一,Gal以1→3糖苷键连接构成多糖YZH4b的另一条主链,在6位上有分支;支链由Rha、Ara、Xy1、Man、Glc、Gal组成,其中,Rha以1→4连接,Ara和Xyl以1→3连接,Man以1→3,4,6连接,Glc以1→3,1→4,1→6或1→3,6连接,Gal以1→3连接;末端残基由Ara和Glc组成。清除自由基实验表明,新疆一枝蒿多糖对羟自由基、DPPH·具有良好的清除作用,且清除能力与多糖浓度存在一定的量效关系,当YZH4b浓度达到2.5mg/mL时,羟自由基和DPPH·青除率可分别达77.23%和65.43%。为一枝蒿多糖的开发利用提供了一定的理论依据。
【关键词】:新疆一枝蒿 多糖 分离纯化 结构 自由基
【学位授予单位】:中央民族大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R29
【目录】:
- 摘要3-5
- ABSTRACT5-10
- 第一章 前言10-21
- 1.1 新疆一枝蒿简介10
- 1.2 植物多糖的研究及应用10-13
- 1.3 植物多糖的研究方法13-15
- 1.4 新疆一枝蒿的研究进展15-20
- 1.5 新疆一枝蒿多糖的研究意义及目的20-21
- 第二章 实验方法21-31
- 2.1 实验试剂与仪器21-22
- 2.2 技术路线22-23
- 2.3 新疆一枝蒿粗多糖(YZHc)的研究方法23-25
- 2.4 新疆一枝蒿多糖的纯化研究方法25-27
- 2.5 新疆一枝蒿多糖(YZH_(4b))的结构研究方法27-30
- 2.5.1 新疆一枝蒿多糖(YZH_(4b))的纯度鉴定及相对分子质量的测定27-28
- 2.5.2 新疆一枝蒿多糖(YZH_(4b))的单糖组成分析28-29
- 2.5.3 新疆一枝蒿多糖(YZH_(4b))的红外色谱分析29
- 2.5.4 新疆一枝蒿多糖(YZH_(4b))的甲基化分析29-30
- 2.5.5 新疆一枝蒿纯化多糖(YZH_(4b))的核磁分析30
- 2.6 新疆一枝蒿多糖清除自由基活性测定30-31
- 第三章 结果与讨论31-54
- 3.1 新疆一枝蒿水溶性粗多糖(YZHc)的提取工艺31-42
- 3.2 新疆一枝蒿粗多糖(YZHc)的理化性质42
- 3.3 新疆一枝蒿粗多糖(YZHc)中蛋白质、半乳糖醛酸及糖含量的测定42-44
- 3.4 新疆一枝蒿水溶性粗多糖(YZHc)的分离纯化44-46
- 3.4.1 新疆一枝蒿粗多糖的初步纯化44
- 3.4.2 新疆一枝蒿初步纯化多糖的酸性乙醇分级44-45
- 3.4.3 新疆一枝蒿纯化多糖的制备45-46
- 3.5 新疆一枝蒿多糖(YZH_(4b))的结构研究46-50
- 3.5.1 新疆一枝蒿多糖(YZH_(4b))的纯度及分子量鉴定46-47
- 3.5.2 新疆一枝蒿纯化多糖(YZH_(4b))的单糖组成分析47
- 3.5.3 新疆一枝蒿纯化多糖(YZH_(4b))的红外谱图分析47-48
- 3.5.4 新疆一枝蒿纯化多糖(YZH_(4b))的甲基化结果分析48-50
- 3.5.5 新疆一枝蒿纯化多糖(YZH_(4b))的核磁共振分析50
- 3.6 新疆一枝蒿多糖的清除自由基活性研究50-54
- 3.6.1 新疆一枝蒿多糖体外清除·OH自由基的活性50-52
- 3.6.2 新疆一枝蒿多糖体外清除DPPH自由基的活性52-54
- 第四章 结论与展望54-56
- 4.1 结论54-55
- 4.2 展望55-56
- 参考文献56-62
- 附录62-71
- 致谢71-72
- 攻读学位期间发表的学术论文72
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