二至天癸颗粒对卵泡颗粒细胞Fas通路的影响

发布时间：2019-10-13 03:34

【摘要】：目的:研究二至天癸颗粒对卵泡颗粒细胞Fas通路的影响,分析Fas通路关键蛋白表达水平与妊娠结局的关系,探讨二至天癸颗粒改善妊娠结局可能的分子机制,为卵母细胞质量评估及胚胎选择提供可能的分子指标。方法:一、临床研究:选取行IVF-ET的肾气虚证不孕患者72例,随机分成治疗组36例(二至天癸颗粒+IVF)和对照组36例(安慰剂颗粒+IVF)。采用标准长方案进行控制性超排卵(COH),治疗组加用二至天癸颗粒、对照组加用安慰剂颗粒。取卵日收集卵泡GC,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测颗粒细胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,实时荧光定量PCR测定m RNA含量,记录肾虚证候积分、获卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、生化妊娠率和临床妊娠率,观察组间差异。二、动物实验:7周龄雌性昆明小鼠180只,随机数字表法分三组,每组各60只:中药组(二至天癸颗粒加HMG超排卵)、对照组(HMG超排卵)、空白组。第一部分:每组各30只取卵及颗粒细胞,Western Blot检测颗粒细胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,RTPCR测定m RNA含量。记录获卵数、MⅡ卵数、计算优质卵率(MⅡ卵数/获卵数),荧光素酶法检测每只小鼠MⅡ卵ATP,计算单卵平均ATP含量,观察组间差异。第二部分:每组剩余30只取胚,记录胚胎数、优质胚胎数、计算优质胚胎率,荧光素酶法检测每只小鼠所获胚胎ATP,计算单胚平均ATP含量,观察组间差异。分别将4个蛋白及m RNA含量与MⅡ卵平均ATP、和胚胎平均ATP进行相关性分析。结果:一、临床研究:(一)治疗组治疗后肾气虚症状明显改善,肾虚证候积分明显低于治疗前(P0.01)及对照组(P0.01),治疗前后肾气虚证候积分差值明显高于对照组(P0.01)。(二)治疗组超排卵Gn用量及天数小于对照组(P0.05);HCG日E2/获卵数高于对照组(P0.05)、P低于对照组(P0.05),LH无明显差异(p0.05);优卵数、优质卵率、优质胚胎率均高于对照组(P0.05);获卵数和受精率无明显差异(p0.05)。(三)治疗组和对照组生化妊娠率无明显差异(p0.05);治疗组临床妊娠率高于对照组(P0.05)。(四)两组患者GC中均有Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3的m RNA和蛋白表达,且在治疗组的表达均低于对照组(P0.05);与未妊娠者相比,妊娠者GCFas L、Fas、Caspase8、Caspase3的m RNA和蛋白表达均较低(P0.05)。二、动物实验:(一)三组获卵数和MⅡ卵数比较,结果均为中药组对照组空白组,但中药组和对照组之间无明显差异(p0.05),两组与空白组之间均有显著差异(p0.01);三组优质卵率和MII卵平均ATP含量比较,结果均为中药组空白组对照组,且中药组明显高于对照组(P0.05),但中药组和空白组相比、空白组和对照组相比均无明显差异(p0.05)。(二)三组胚胎数比较,中药组对照组空白组,但对照组和空白组相比无明显差异(p0.05);优质胚胎数中药组空白组对照组,但中药组和空白组相比、空白组和对照组相比均无明显差异(p0.05);优质胚胎率和胚胎平均ATP空白组和中药组之间无明显差异(p0.05),两组均明显高于对照组(p0.01)。(三)中药组Fas和Caspase3蛋白和m RNA的表达均低于对照组(P0.05),与空白组无明显差异(p0.05);Fas L蛋白和m RNA在三组的表达均无明显差异(p0.05);中药组Caspase8m RNA与对照组之间无明显差异,但是Caspase8蛋白的表达低于对照组。(四)Caspase3蛋白和m RNA的表达与MII卵平均ATP含量和胚胎平均ATP含量均呈负相关。结论:一、二至天癸颗粒不影响诱导排卵的疗效,可明显改善患者肾虚症状,改善HCG日激素水平,提高优质卵率、优质胚胎率,进而提高临床妊娠率。二、二至天癸颗粒可以下调颗粒细胞Fas通路关键蛋白Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3及m RNA的表达量,推测为其改善卵细胞质量的可能机制之一。三、二至天癸颗粒可以提高小鼠卵细胞和胚胎线粒体活性,推测为其提高卵细胞质量和胚胎质量的可能机制之一。四、小鼠颗粒细胞Caspase3的表达与卵细胞和胚胎质量呈负相关,推测可作为评价卵细胞和胚胎质量的客观指标之一。
【图文】：

图 1 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 mRNA 表达的比较表 10 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 蛋白的相对表达量比较指标 治疗组 对照组 t pFasL 0.74±0.19 0.85±0.07 -3.050 0.003（P<0.01）Fas 0.80±0.07 0.84±0.06 -2.484 0.015（P<0.05）Caspase8 0.73±0.15 0.79±0.08 -2.005 0.049（P<0.05）Caspase3 0.76±0.06 0.79±0.07 -2.263 0.027（P<0.05）

图 1 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 mRNA 表达的比较表 10 GC FasL、Fas、Caspase8、Caspase3 蛋白的相对表达量比较指标 治疗组 对照组 t pFasL 0.74±0.19 0.85±0.07 -3.050 0.003（P<0.01）
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R271.9

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 连方,孙振高,张建伟,张宁,刘延荷,穆琳,张鹏;二至天癸方对小鼠卵细胞质量影响的实验研究[J];中国中西医结合杂志;2004年07期

2 董瑞霞;唐书生;;二至功血汤治疗青春期功能失调性子宫出血临床疗效[J];中医学报;2010年06期

3 黄仲阳;黄昕;;“气交变”之二至[J];家庭中医药;2008年06期

4 郑里翔;张玉仁;邓科穗;赵益;朱卫丰;刘红宁;;二至汤对阴虚阳虚荷瘤小鼠肿瘤生长的影响[J];陕西中医;2008年12期

5 王泽森;;习惯影响成败[J];中国食品药品监管;2011年03期

6 张春敏;;自拟二至四草汤治疗更年期功能失调性子宫出血临床观察[J];中医药临床杂志;2014年03期

7 苏林;帮助孩子克服办事拖延[J];心理与健康;1998年02期

8 张孟林;;加味二至汤应用体会[J];陕西中医;1980年04期

9 朱晓薇;不同提取方法对二至提取液中总多糖及齐墩果酸的影响[J];中成药;1996年06期

10 刘洪峰;郭长江;;四物二至汤加减治疗眩晕68例[J];中医临床研究;2011年13期

相关会议论文 前4条

1 郭颖;连方;;二至天癸颗粒对年老小鼠卵母细胞质量及早期胚胎发育潜能的影响[A];2010全国中西医结合围绝经期专题学术会议论文集[C];2010年

2 黎慧贤;谢清兰;;“无烟家庭·我做得到!”动员市民建立无烟生活环境的社会平台[A];第15届全国控制吸烟学术研讨会论文集[C];2011年

3 王琳;连方;马凤梅;刘延荷;孙振高;张艳萍;滕怀香;;二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响[A];第九次全国中医妇科学术大会论文集[C];2009年

4 王琳;连方;马凤梅;刘延荷;孙振高;张艳萍;滕怀香;;二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响[A];全国第八次中医妇科学术研讨会论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前6条

1 天津南开 韩德承;二至二妙皆为丸，一字之差功效异[N];上海中医药报;2013年

2 连方；孙振高；张建伟;二至天癸方可提高卵细胞质量[N];中国医药报;2005年

3 云南副主任医师 傅淑芳;治软组织损伤验方[N];家庭医生报;2004年

4 王岩;目前在南方可重点种植的药材及投资效益分析[N];中国特产报;2001年

5 记者 杨世智;我省首季气温偏低降雨偏少[N];甘肃日报;2011年

6 ;外籍高层次人才入境居留更便利[N];人民公安报;2002年

相关博士学位论文 前2条

1 李婷婷;二至天癸颗粒对卵泡颗粒细胞Fas通路的影响[D];山东中医药大学;2016年

2 王琳;行IVF-ET高龄妇女肾气虚的机理探讨与二至天癸颗粒疗效评估[D];山东中医药大学;2008年

相关硕士学位论文 前8条

1 郭颖;二至天癸颗粒对衰老卵母细胞质量及早期胚胎发育潜能的影响[D];山东中医药大学;2010年

2 刘佳;归参二至片的药学研究[D];成都中医药大学;2014年

3 王红霞;加味二至煎治疗便秘型肠易激综合征的临床与实验研究[D];河北医科大学;2009年

4 孙振高;二至天癸方提高体外受精—胚胎移植卵细胞质量的实验与临床研究[D];山东中医药大学;2003年

5 郑轶芬;二至升板方治疗阴虚血瘀证难治性ITP的临床观察[D];湖南中医药大学;2014年

6 穆琳;二至天癸方提高卵细胞质量与颗粒细胞IGF-1R m RNA表达量相关性研究[D];山东中医药大学;2004年

7 王苏霞;加味二至煎治疗便秘型肠易激综合征作用机制实验研究[D];河北医科大学;2009年

8 刘新苑;二至天癸颗粒对LPD患者着床期子宫内膜VEGF影响的研究[D];山东中医药大学;2011年

，

本文编号：2548448