不同时间点电针对局灶性脑缺血大鼠血管新生相关因子ES、TSP-1的影响

发布时间：2020-03-22 02:06

【摘要】：目的:比较不同时间点电针对局灶性脑缺血大鼠血管新生相关因子内皮抑素(ES)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响,以血管新生为切入点,探讨不同时间点电针对缺血性脑卒中的治疗效果及其可能作用机制,为临床治疗缺血性脑卒中提供新的实验依据。方法:从100只雄性SD大鼠中随机选取27只作为假手术组,余下73只采用Zea Longa改良版右侧颈外动脉线栓法建立局灶性大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。最终将54只造模成功的大鼠随机分为模型组(27只)和电针组(27只),根据不同治疗时间将每组分为三个亚组,即3d、7d、14d组,每个亚组9只大鼠。假手术组和模型组大鼠不作任何治疗,电针组于术后1d开始,选取“百会”“水沟”二穴,根据上述不同时间点进行连续治疗,再分别于3d、7d、14d后处死取材。利用神经功能缺损体征评分于术后4h、3d、7d、14d观察每组大鼠神经功能损伤及恢复情况;利用HE染色法观察各组大鼠缺血区海马组织病理学改变;利用TTC染色法检测各组大鼠脑梗死体积;采用免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测分析各组大鼠不同时间点脑缺血区海马组织ES和TSP-1蛋白表达情况;采用免疫组织化学法和Weidner法测定脑梗死区的微血管密度,观察血管新生情况;采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测大鼠缺血区海马组织中ES mRNA、TSP-1 mRNA的相对表达量。结果:1.神经功能缺损评分术后4h,3d,7d,14d,模型组神经功能缺损体征评分均高于假手术组(P0.01);术后4h,3d,电针组神经功能缺损评分与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05);术后7d,14d,电针组神经功能缺损程度低于模型组(P0.01)。电针组不同时间点比较:与4h组比较,3d组评分降低(P0.05);7d组、14d组评分显著降低(P0.01);与3d组比较,7d组、14d组评分均显著降低(P0.01);与7d组比较,14d组评分降低,差异有统计学意义(P0.05)。2.病理组织学观察假手术组脑组织结构完整,层次分明,神经元形态正常,排列有序,可见清晰完整细胞核;术后3d,模型组及电针组缺血侧均出现不同程度的脑组织间质水肿,细胞排列紊乱,结构疏松呈网状,部分胞核固缩等病理改变;治疗7d后,电针组缺血脑组织损伤程度较模型组稍微减轻;治疗14d后,电针组缺血脑组织间质水肿明显减轻,胞核清晰,脑组织损伤程度较模型组明显减轻。3.脑梗死体积检测假手术组未见梗死区,模型组和电针组均出现不同程度梗死区。治疗3d后,与模型组比较,电针组脑梗死体积无明显差异(P0.05);治疗7d,14d后,电针组脑梗死体积小于模型组(P0.01)。电针组不同时间点比较:与3d组比较,7d组、14d组脑梗死体积均缩小(P0.01);与7d组比较,14d组脑梗死体积缩小(P0.01)。4.Western Blot结果显示:假手术组ES和TSP-1蛋白呈少量表达。模型组ES和TSP-1蛋白在各时间点与假手术组之间均有极显著性差异(P0.01)。治疗3d后,电针组与模型组ES和TSP-1蛋白表达之间均无明显差异(P0.05)。治疗7d,14d后,电针组ES和TSP-1蛋白表达量较模型组均显著降低(P0.01)。电针组不同时间点比较:与3d组比较,7d组、14d组ES和TSP-1蛋白表达量均显著降低(P0.01);与7d组比较,14d组ES蛋白表达量无明显差异(P0.05),TSP-1蛋白表达量降低(P0.05)。5.RT-qPCR结果显示:假手术组ES mRNA和TSP-1 mRNA呈少量表达。模型组ES mRNA和TSP-1 mRNA相对表达量在3d,7d,14d较假手术组均显著增高(P0.01)。治疗3d后,电针组ES mRNA相对表达量与模型组之间无明显差异(P0.05),TSP-1 mRNA相对表达量较模型组降低(P0.01)。治疗7d,14d后,电针组ES mRNA和TSP-1 mRNA相对表达量较模型组均显著降低(P0.01)。电针组不同时间点比较:与3d组比较,7d组ES mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TSP-1 mRNA相对表达量无明显差异(P0.05),14d组ES mRNA和TSP-1 mRNA相对表达量明显下降(P0.05或P0.01);与7d组比较,14d组ES mRNA相对表达量降低(P0.05),TSP-1 mRNA相对表达量无明显差异(P0.05)。6.免疫组化结果显示:假手术组ES、TSP-1阳性细胞呈少量表达,模型组ES、TSP-1阳性表达在3d,7d,14d时较假手术组均显著增加(P0.01)。治疗3d后,电针组ES阳性表达较模型组降低(P0.05),TSP-1阳性表达无明显差异(P0.05);治疗7d,14d后,电针组ES、TSP-1阳性表达较模型组均显著降低(P0.01)。电针组不同时间点比较:与3d组比较,7d组ES、TSP-1阳性表达增加(P0.05或P0.01),14d组ES阳性表达无明显差异(P0.05),14d组TSP-1阳性表达增加(P0.05);与7d组比较,14d组ES、TSP-1阳性表达均无明显差异(P0.05)。7.缺血区血管新生观察假手术组微血管密度(MVD)呈少量表达,模型组MVD在3d,7d,14d时均高于假手术组(P0.01)。治疗后各时间点,电针组MVD较模型组均显著增加(P0.01)。电针组不同时间点比较:与3d组比较,7d组、14d组MVD显著增加(P0.01);与7d组比较,14d组MVD显著增加(P0.01)。结论:1.电针疗法能够改善MCAO大鼠的神经功能缺损体征和脑组织病理变化,缩小脑梗死体积。2.不同时间点电针能够下调大鼠缺血侧海马区血管新生抑制因子ES、TSP-1蛋白及mRNA表达量,这可能是电针疗法促进血管新生,从而恢复脑缺血后神经功能,发挥脑保护作用的机制之一。
【图文】：

病理观察,脑组织,电针,神经功能缺损

图 1 各组大鼠缺血区海马区不同时间点脑组织病理观察（10x40 倍）Fig.1 Pathological observation of cerebral tissue at different time points inhippocampal area of ischemic region of rats in each group (10x40)各组大鼠不同时间点神经功能缺损体征评分比较果如表 1、图 2 所示，假手术组大鼠术后肢体活动正常，评分均为 0 分。和电针组大鼠术后均出现不同程度的神经功能缺损体征，活动受限。术后d、7d、14d，模型组神经功能缺损体征评分均高于假手术组，差异具有统义（P<0.01）；术后 4h、3d，电针组神经功能缺损评分与模型组比较，统计学意义（P>0.05）；术后 7d、14d，电针组神经功能缺损程度明显低组，有极显著性差异（P<0.01）。电针组不同时间点比较：与 4h 组比较，评分无明显差异（P>0.05），7d 组、14d 组评分显著降低，，有极显著性差

神经功能缺损评分,电针

ischemia rats in each group (n=9,x ±s)注：与假手术组比较，△P<0.05，△ △P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；电针组之间比较：与 4h 组比较，#P<0.05，##P<0.01；与 3d 组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与 7d 组比较，※P<0.05，※※P<0.01。△P<0.05 and△ △P<0.01 vs sham operation group,*P<0.05 and**P<0.01 vs model group,comparison between EAgroup:#P<0.05 and##P<0.01 vs 4h group,▲P<0.05 and▲▲P<0.01vs 3d group,※P<0.05 and※※P<0.01 vs 7d group.组别 4h 3d 7d 14d假手术组 0 0 0 0模型组 2.67±0.50△ △2.44±0.53△ △2.22±0.44△ △2.00±0.50△ △电针组 2.56±0.53 2.11±0.60 1.22±0.67**##▲▲0.89±0.33**## ▲ ▲※
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245

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