针刺治疗对肌筋膜触发点大鼠脊髓蛋白质组学差异性蛋白表达的影响

发布时间：2020-03-24 04:59

【摘要】：研究目的:通过TMT蛋白组学分析筛选出肌筋膜疼痛触发点(Myofascial Trigger Points,MTr Ps)大鼠脊髓差异蛋白,并对这些蛋白做GO功能注释及KEGG通路富集。根据GO功能注释和KEGG通路富集结果,筛选出与MTr Ps发病机制相关的信号通路,选择MTr Ps发病机制最相关的信号通路进行研究。通过Unpoit查找所选择研究的信号通路上的差异性蛋白的功能,探讨它们之间如何相互作用,导致大鼠腓肠肌形成MTr Ps。再通过蛋白质免疫印迹,观察针刺和假针刺干预后,筛选出的蛋白表达水平的变化,为针刺治疗触发点性疼痛的临床有效性提供理论依据。研究对象和方法:以SD大鼠为模型,实验设计4个组别,分别为CG组(空白对照组)和MG组(造模组),DG组(针刺组)和NDG组(假针刺组)。CG组和MG组各选10个大鼠脊髓样本做TMT相对定量蛋白质组学生物信息学分析,以倍数变化大于1.2倍(上调大于1.2倍或者下调小于0.83)且P value小于0.05的标准筛选出两组之间存在的差异性蛋白,再根据GO功能注释及KEGG信号通路分析结果相结合,筛选出与MTr Ps发病机制相关的生物学通道。然后通过Western Blot实验验证四组大鼠脊髓样本中,所筛选出的信号通路上的上调和或下调蛋白表达水平的变化,所获得的数据用SPSS 20.0软件,采用单因素方差分析的统计学方法进行分析。研究结果:1 iTRAQ实验结果本实验共鉴定SD大鼠脊髓样本中蛋白质5095个,最终筛选差异表达蛋白质,上调蛋白70个,下调蛋白58个,共128个。最后,根据研究目的以及GO功能注释和KEGG通路富集结果,选择差异性蛋白富集最显著的一条通路进一步研究,即ECM-受体之间的相互作用。该通路上差异性蛋白主要有血小板反应蛋白1(thrombospondin 1,THBS-1)、胶原蛋白,VI型,α(collagen,type VI,alpha,COL6A)、整合素β3(integrin beta 3,ITGβ3)和玻璃体结合蛋白(vitronectin,VN)。2蛋白质免疫印迹结果THBS-1、VN、ITGβ3、COL6A四个蛋白在MG组/CG组表达水平上升,组间差异非常显著(P0.01)。与i TRAQ实验结果一致我们还发现针刺后COL6A蛋白表达水平较MTr Ps模型组显著下降(P0.01),假针刺干预后表达上水平也下降(P0.05)。假针刺干预MTr Ps,COL6A蛋白表达水平下降没有针刺干预后更显著。ITGβ3蛋白的DG组/MG组和NDG组/MG组表达量都显著下降(P0.01)。VN蛋白的DG组/MG组下降显著(P0.05),但DG组/MG组组间没有差异。THBS-1蛋白表达水平:DG组/MG组与NDG组/MG组组间都没有差异,但较MG组,DG组与NDG组的该蛋白表达水平均有下降的趋势。研究结论:1.大鼠脊髓内THBS-1、ITGβ3、COL6A和VN这四个蛋白表达水平上调,可能促进中枢神经元的分化以及神经元突触的发生和形成,尤其是兴奋性突触的增多,导致MTr Ps大鼠的中枢致敏。2.针刺可能通过降低MTr Ps大鼠脊髓上调的ITGβ3表达水平减轻中枢致敏。此外,准确定位骨骼肌上MTr Ps的位置行针刺比针刺触发点以外的骨骼肌处治疗效果更显著。
【图文】：

表 1 大鼠分组、简称及数量组别 简称 数量（只）空白对照组 CG 20造模组 MG 20针刺组 DG 10假针刺组 NDG 103.2 研究方法3.2.1 实验仪器自制打击器 自制打击器主要有两个部分组成：杆和重物，总重量为 1200g；杆长 60cm，端为 1cm×1cm 的圆形接触面，见图 1。电动跑台 DSPT-202 型多通道大鼠跑台，中国杭州段氏制作，见图 2。肌电图仪 Z2J-MB-NCC08 型肌电图仪，上海诺诚医疗器械有限公司；电极：同心圆针电极。见图 3。银针 型号：0.35mm×45mm 乐灸牌，见图 4。

表 1 大鼠分组、简称及数量组别 简称 数量（只）空白对照组 CG 20造模组 MG 20针刺组 DG 10假针刺组 NDG 103.2 研究方法3.2.1 实验仪器自制打击器 自制打击器主要有两个部分组成：杆和重物，总重量为 1200g；杆长 60cm，端为 1cm×1cm 的圆形接触面，见图 1。电动跑台 DSPT-202 型多通道大鼠跑台，中国杭州段氏制作，见图 2。肌电图仪 Z2J-MB-NCC08 型肌电图仪，上海诺诚医疗器械有限公司；电极：同心圆针电极。见图 3。银针 型号：0.35mm×45mm 乐灸牌，见图 4。
【学位授予单位】：上海体育学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245

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本文编号：2597832