攀援耳草的民间应用及其抗结核活性研究

发布时间：2020-05-07 08:43

【摘要】：全球结核病疫情严峻,2017年全球约1000万人感染结核病,死亡160万病例(包括30万HIV阳性结核病患者),加上世界各地耐多药结核菌和广谱耐药结核菌的剧增,导致目前结核病防治面临极大挑战,开发新型抗结核药物及新的辅助治疗迫在眉睫。民族医药是人类长期实践积累的资源宝库,是各民族长期运用传统药物与疾病奋斗的经验总和,为现代医药的研究提供了重要的资源和线索。长期被运用于结核病治疗的传统药物具有潜在的药用价值和价格优势,对其进行收集、整理、研究不仅是对传统医药知识的保护,也是对现代医药的重要补充。本文采用文献研究、民族学植物调查、民族学调查、植物化学研究等跨学科研究方法对15个民族涉及结核病治疗的传统单验方和复方进行整理,并从中筛选出18种民族药做进一步的活性验证,实验结果显示部分民族药具有抗分枝杆菌活性。综合药物易获得性、民间应用情况等选择活性较好的攀援耳草(Hedyotis scandens Roxb.)作为重点研究对象,对其进行有效部位筛选及相关的化学成分分析,为攀援耳草民间应用提供科学的解释,也为攀援耳草的深入研究和开发运用奠定基础。整体上,本论文的主要研究内容包含如下四个方面:(1)抗结核民族医药理论、药方整理。归纳了部分民族医药的临床基础理论(主要为苗、侗、瑶、彝)以及这些民族对结核病的认识、分类及诊治;总结了民族医药共同的用药特点;收集整理民族医药中用于治疗结核病(包括肺内结核和肺外结核)的单验方677首,复方477首,共计1154首。涉及15个民族,包括苗族、瑶族、侗族、彝族、土家、基诺族、壮族、黎族、德昂族、藏族、毛南族、仡佬族、水族、傣族、回族,以贵州的苗族、侗族居多;药物收集内容包含科属、形态、入药部位、地方名、汉语译名、产地、最佳采集方法和时间、用药禁忌等。(2)部分抗结核民族药活性初步定性验证。基于抗结核民族药验方内容,从中筛选出18种民族药进行科学性验证,利用乙醇提取法制备粗提物,以分枝杆菌属非致病模式菌株耻垢分枝杆菌为测试菌,采用纸片扩散法,初步定性判断药物粗提物的抑菌活性。结果显示:18种民族药粗提物中,金荞麦、攀援耳草、岩豇豆、矮地茶4种对耻垢分枝杆菌具有较明显的抑菌效果,其中以金荞麦和攀援耳草效果最为显著,在浓度为200 mg/mL时,抑菌圈直径均大于10 mm;500mg/mL时,抑菌圈直径均大于13 mm。而这些药物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、胶红酵母菌等几乎没有抑菌活性(仅金荞麦和岩豇豆提取物对金黄色葡萄球菌、白薇提取物对胶红酵母菌具有一定的抑菌活性),说明上述药物对分枝杆菌具有特异性的抗菌活性,民间治疗结核药方具有较高的针对性。(3)攀援耳草抗分枝杆菌活性部位筛选。在上述基础上,对攀援耳草粗提物利用石油醚、二氯甲烷和正丁醇进行不同极性萃取及抑菌活性检测,结果显示其活性成分主要集中在二氯甲烷部位和正丁醇部位。进一步利用薄层色谱法、柱色谱法、半制备型高效液相色谱(HPLC)等对二氯甲烷部位进行分离,锁定攀援耳草活性部位在二氯甲烷:甲醇比例25:1、10:1、5:1段,为样品Fr.11-Fr.16,选择活性最好的Fr.13样品进行后续分离,该样品活性成分主要集中在二氯甲烷:甲醇比例15:1段。(4)攀援耳草挥发性物质成份鉴定。本研究首次利用GC-MS分析测定了攀援耳草三个萃取部位并鉴定了37种挥发性成分,它们涉及醛、酮、醇、酯类、不饱和烷烃等种类。综上,本研究在一定程度上推动了抗结核民族药收集、整理工作进程;经过体外抗耻垢分枝杆菌活性实验初步验证了部分抗结核民族药的活性;对活性较好的攀援耳草活性部位进行了分离与追踪,证实了攀援耳草作为治疗结核病的民族药理用途,这为攀援耳草后期进一步筛选和分离抗结核活性物质及药物的开发奠定了一定的基础。
【学位授予单位】：贵州民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R29

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