健脾化瘀方治疗脾虚瘀毒型肠癌代谢通路的研究

发布时间：2020-05-08 01:47

【摘要】：研究目的:应用代谢组学方法分析脾虚瘀毒型肠癌患者代谢产物变化规律,利用分子生物学技术对异常代谢通路进行验证,为健脾化瘀方治疗脾虚瘀毒型肠癌提供客观科学依据。研究方法:1)选取我院83例脾虚瘀毒型肠癌患者和90例健康志愿者,利用液相色谱/质谱(LC-MS)对收集血清标本进行检测,所得数据输入SIMCA-13软件进行多变量统计分析,将找到的潜在差异化合物在数据库进行检索与确认,得到最终匹配内源性化合物,并进行拓扑分析和富集分析筛选异常代谢通路。2)对筛选出的代谢通路进行动物实验验证,采用人结肠癌LOVO细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察给药后裸鼠日常活动、精神状态及肿瘤生长变化,计算瘤体体积抑制率,采用Western Blot法、免疫组织化学方法检测移植瘤组织中糖酵解相关蛋白的变化。采用乳酸脱氢酶测定试剂盒和葡萄糖含量测定试剂盒检测健脾化瘀方对裸鼠血清中LDH及葡萄糖含量的影响。研究结果:1)将83例肠癌患者和90例健康志愿者血清进行LC-MS代谢组学研究,进行多变量分析,发现两组血清产物水平呈现完全不同的分布。通过数据分析出的差异代谢物有19种,其中在HMDB中鉴定出结构的有14种,10种代谢物表达下降,4种代谢物表达升高。拓扑分析和富集分析显示其中糖酵解通路受到影响。2)健脾化瘀方能有效改善裸鼠生存状态,给药后健脾化瘀方组裸鼠种植瘤体积明显小于空白对照。健脾化瘀方给药组裸鼠血清乳酸脱氢酶活性及葡萄糖含量下降。Western Blot及免疫组化结果显示,与空白对照组相比,健脾化瘀方组GLUT-1、PKM2、HIF-1 α、C-Myc的表达下调。Western Blot结果显示,健脾化瘀方给药组PI3K、P-PI3K、AKT、mTOR、P-mTOR、P-mTOR蛋白表达下调。研究结论:1)基于LC-MS技术对晚期肠癌患者和健康志愿者血清代谢组学研究,脾虚瘀毒型肠癌的患者血清代谢物发生了变化,代谢通路分析显示,其作用机制可能与糖酵解代谢通路改变有关。2)健脾化瘀方能明显抑制人结肠癌LOVO细胞增殖,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。3)健脾化瘀方给药组乳酸脱氢酶活性、葡萄糖含量及糖酵解相关蛋白表达下调,提示其抗肿瘤机制与抑制肿瘤细胞糖酵解相关。4)健脾化瘀方给药组PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达下调,提示健脾化瘀方可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR/HIF-1 α介导的糖酵解信号转导通路,为探讨健脾化瘀方抗肿瘤的异常代谢的机制提供了新思路。
【图文】：

ＰＬＳ－ＤＡ方法再次进行分析。不同颜色符号在此种建模中分散的越开说明两组之间的成分逡逑差异越显著。图例１绿色代表肠癌组，图例２蓝色代表健康组，本研究ＰＬＳ－ＤＡ得分图如逡逑图２－２所示，显示肠癌组和健康组血清样本具有差异。逡逑１２逡逑

图２－２．正离子模式下基于肠癌组和健康组血清代谢轮廓的ＰＬＳ－ＤＡ得分图逡逑３．３运用０ＰＬＳ－ＤＡ分析方法去除与样品分类无关的信息，对血清全谱进行模式判别分逡逑析，发现两组样本能得到分离。图２－３为正离子模式检测所得数据经０ＰＬＳ－ＤＡ简化降逡逑维后的得分图。逡逑ＣＶＳ－肠癌－１－１．Ｍ４邋（ＯＰＬＳ－ＤＡ）逦＿邋１逡逑Ｓｃａｌｅｄ邋ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｌｙ邋ｔｏ邋Ｒ２Ｘ逦■邋２逡逑Ｃｏｌｏｒｅｄ邋ａｃｃｏｒｄｉｎｇ邋ｔｏ邋ｃｌａｓｓｅｓ邋ｉｎ邋Ｍ４逡逑？ｌ邋逦－—逦逦逦￣逡逑４０－逦？逡逑＿６0逦ｒ逦ｉ逦；逦ｊ邋＇￣￣＇＞逦＇逦＇逦＼逦＇？逦＇逦！逦’‘逦：逦！逦！逦１逦１逦１逦！逦１逦＇逦１邋￣逡逑－６０逦－４０逦－２０逦０逦２０逦４０逡逑１．００１０９邋＊邋ｔ［ｌ］逡逑：［１］邋＝邋０．１０１逦Ｒ２ｘ［ｘｓｉｄｅ邋Ｃｏｍｐ．邋１］邋＝邋０．０９５８邋Ｅｌｌｉｐｓｅ：邋Ｈｏｔｅｌｌｉｎｇ＇ｓ邋Ｔ２邋（９５％）逡逑ＳＳＭＣＡ邋：Ｇ邋０邋－逦ｎ：２ｉＳ：Ｋ邋（ＵＴＯＨ）逡逑图２－３．正离子模式下基于肠癌组和健康组血清代谢轮廓的ＯＰＬＳ－ＤＡ得分图逡逑１３逡逑
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R273

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本文编号：2653906