活血通络起痿汤及“水蛭-蜈蚣”治疗糖尿病勃起功能障碍的临床与实验研究

发布时间：2020-05-14 06:34

【摘要】：背景糖尿病(diabetesmellitus,DM)是世界卫生组织公认的三大慢性病之一。糖尿病性勃起障碍(diabetes-induced erectile dysfunction,DIED)是糖尿病常见并发症之一。早在1992年美国国立卫生院专家会议就确定了DM是男女两性性功能障碍的重要病因。DM患者勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)的发病率是非DM患者的1.9-5倍,世界范围内所报道的DIED发病率为20%-75%。中国作为糖尿病第一大国,预计到2025年,中国DIED患者会达到4000万。DIED属于血管性ED的范围,其发生的病理基础与阴茎血管内皮功能受损密切相关,即DM主要是通过影响血管内皮功能而导致ED。因此,深入研究DIED可能的血管内皮功能相关机制,有助于发现DIED治疗的新靶点,为寻找更为安全有效的治疗药物提供可靠依据。目的本研究通过临床和实验两大部分,旨在进一步明确“活血通络起痿汤”联合小剂量他达拉非治疗DIED患者的临床疗效以及探索活血通络药对“水蛭-蜈蚣”对于DIED大鼠的可能的作用机制,以期为本方剂提供更多的临床及机制证据。方法临床研究:采用临床随机对照研究。符合纳入标准的DIED患者,记录患者的一般资料、症状、体征、治疗史及合并疾病等情况,进行相关中医证候评分并记录。66例患者均给予以活血通络起痿汤配方颗粒口服,治疗周期为28天。分别记录每个患者治疗前后的国际勃起功能指数(International Index of Erectile Function5,IIEF-5)评分、中医症状积分变化情况,详细记录患者在用药期间的各种不良反应。观察活血通络起痿汤对DIED的临床疗效,计算并对比两组治疗的有效率及中医证候积分改变程度。实验研究:50只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、中药高剂量组、中药低剂量组五组,每组10只。空白对照组采用去离子水干预8周,各DM模型组采用55mg/kg的链脲佐菌素(streptozocin,STZ)干预一次,STZ注射10周后,对存活的糖尿病大鼠进行筛选。对空白对照组和STZ模型组采用去离子水灌胃,阳性对照组采用0.5mg/kg/d的他达拉非(相当于人体用药6倍)进行灌胃干预,药对高剂量组采用0.6mg/kg/d“水蛭-蜈蚣”颗粒水悬液(相当于人体用药12倍),药对低剂量组0.15mg/kg/d“水蛭-蜈蚣”颗粒水悬液(相当于人体用药3倍),每日一次,均干预8周。观察活血通络药对“水蛭-蜈蚣”对DIED大鼠模型的一般情况、血糖水平、海绵体内皮细胞病理形态学、阴茎组织超微结构、海绵体血管内皮细胞损伤标志物(LOX-1)、内皮细胞相关粘附分子(sE-selectin、sICAM-1)以及阴茎组织中nNOS、eNOS、NOS、PDE5蛋白及mRNA表达的影响情况。结果临床研究:治疗组患者的IIEF-5评分改善优于对照组,两组比较差异有统计学意义,P0.05;治疗后对照组在中医证候总评积分改善优于对照组,且差异有统计学意义,P0.05;治疗组临床总有效率为81.8%;对照组总有效率为51.5%,经卡方检验,两组有效率的差异具有统计学意义,P0.05;治疗过程中共发生不良反应4例,其中治疗组出现2例头痛,对照组出现1例面部潮红,1例轻度腰痛,上述症状均为轻度,可自行缓解,均未做任何特殊处理。实验研究:1.经药物干预后,各组DIED模型大鼠之间一般状态、体质量并未显示出明显差异,P0.05;血糖水平方面,药对组血糖水平相较于模型组与他达拉非组更理想,但DIED各组大鼠之间血糖水平差异无统计学意义,P0.05;阴茎勃起频数方面,药对高、低剂量组以及他达拉非组大鼠低于空白组但高于模型组大鼠,且差异均有统计学意义,P0.05;2.血清检测中,各组DM大鼠血清中LOX-1、sE-selectin、sICAM-1表达高于空白组,差异具有统计学意义,P0.05;药对高、低剂量组、他达拉非组与模型对照组相比,血清中LOX-1、sE-selectin、sICAM-1表达更低,差异具有统计学意义,P0.05,且药对高剂量组抑制效果更明显,P0.05;3.在阴茎组织超微结构的观察中,治疗后药对组、他达拉非组大鼠血窦分布较模型组相对规则,内皮细胞密度增加,部分血窦隙内可见红细胞。同时在透射电镜观察下,模型组内皮细胞质膜破损、肿胀、细胞器明显减少甚至无细胞器,核染色质边集浓缩。经药物干预后,药对组、他达拉非组可见一定程度的内皮增生,此外,可见细胞核结构完整,线粒体、高尔基体、内质网等细胞器明显增多或者趋于正常等变化;4.通过Western blot检测蛋白,DIED各组大鼠在eNOS蛋白表达上无差异;nNOS蛋白表达上模型组低于空白组,药对组以及他达拉非组高于模型组,以上差异均具有统计学意义,P0.05,且药对高剂量组优于药对低剂量组与他达拉非组;NOS蛋白表达上模型组低于空白组,药对组以及他达拉非组均高于模型组,差异均具有统计学意义,P0.05,且药对高剂量优于药对低剂量组;阴茎组织PDE5蛋白表达中,模型组表达水平低于空白组且差异有统计学意义,P0.05;药对低剂量组表达水平与模型组相比差异无统计学意义,P0.05,但药对高剂量组和他达拉非组与模型组相比表达水平存在明显上调,P0.05;5.通过RT-PCR检测mRNA,DIED各组大鼠在eNOS mRNA表达上无差异;nNOS mRNA表达上模型组低于空白组,药对组以及他达拉非组高于模型组,以上差异均具有统计学意义,P0.05,且药对高剂量组优于药对低剂量组与他达拉非组;NOS mRNA表达上模型组低于空白组,药对组以及他达拉非组均高于模型组,差异均具有统计学意义,P0.05,且药对高剂量优于药对低剂量组;阴茎组织PDE5mRNA表达中,模型组表达水平低于空白组且差异有统计学意义,P0.05;药对低剂量组表达水平与模型组相比差异无统计学意义,P0.05,但药对高剂量组和他达拉非组与模型组相比表达水平存在明显上调,P0.05;相关mRNA与蛋白在表达上具有一致性。结论1.以活血通络起痿汤为代表方的活血通络法能够安全有效的改善血瘀肾虚型DIED患者的勃起功能及全身症状;2.“水蛭-蜈蚣”药对可以改善DIED大鼠勃起频数,提高勃起状态,以及降低血清LOX-1、sE-selectin、sICAM-1水平,其中药对高剂量组效果更明显;3.“水蛭-蜈蚣”药对在高剂量状态下能够通过上调nNOS、NOS蛋白的mRNA进而增加蛋白含量,具体机制可能是通过抑制PED5活性从而达到类似PDE5抑制剂的作用。
【图文】：

患者,总有效率,统计学,意义

组有效病例数为３３例，其中治愈患者数量４例，显效患者数量４例，有效患者数量９逡逑例，无效患者数量１６例，总有效率为５１．５％。经ｘ２检验，两组有效率的差异具有统计学逡逑意义，见表２、图２。逡逑３９逡逑

正态分布,治疗前后,非参数检验

２．３邋１１ＥＦ－５邋评分逡逑经过治疗后两组ＩＩＥＦ－５评分与治疗前相比较，均有统计学差异，Ｐ＜０．０５；经过治逡逑疗后两组间ＩＩＥＦ－５评分有统计学差异，Ｐ＜０．０５，见表３、图３。逡逑表３两组患者治疗前后１１ＥＦ－５评分比较（ｉ±ｓ）逡逑组别逦完成例数逦治疗前逦治疗后逡逑治疗组逦３３逦１０．７６±４．７０逦１９．７９±３．９９＃＊逡逑对照组逦３３逦１２．３９±４．２８逦１７．３６±４．０９＃逡逑注：经统计，两组患者在治疗前ＵＥＦ－５评分不服从正态分布，经非参数检验，，Ｚ＝－１．３５７，邋Ｐ＝０．１７５＞０．０５，逡逑两组治疗前ＵＥＦ－５评分无统计学差异。两组数据用非参数检验，＃Ｐ＜０．０５，治疗前后１ＩＥＦ－５评分均逡逑有统计学差异。两组治疗后评分经非参数检验统计分析数据，Ｚ＝－２．１５丨，※Ｐ＝（）．０３１＜０．０５，差异有统逡逑计学意义。逡逑＿逦Ｉ邋＿逡逑图３治疗前后１１ＥＦ－５评分比较逡逑４０逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R259;R277.5

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