【摘要】：研究背景针刺介入时机是影响针刺疗效的关键因素,古人按照子午流注、灵龟八法选择针刺施术时机,而在现代针灸临床中针刺时机问题往往被忽视。重视和把握经穴及时机与针刺效应的相关性,不仅可提高针灸临床疗效,同时为针灸治疗疾病提供新的思路。多裂肌对维持脊柱稳定至关重要,近年来以多裂肌为靶点治疗腰痛在康复医学、运动医学中被广泛认可。骨骼肌损伤后修复主要依赖肌卫星细胞增殖,Foxo1、Myostatin作为肌卫星细胞负性调控因子,可抑制肌卫星细胞增殖下调Myod的表达影响成肌细胞分化。本课题组前期从肌细胞生长因子、肌细胞自噬、凋亡、炎症等研究角度已证实电针委中穴、肾俞穴可有效促进模型大鼠损伤多裂肌的修复,本实验将在前期研究的基础上结合针刺介入的时机进一步展开对电针委中穴、肾俞穴治疗腰多裂肌损伤的探讨。研究目的通过免疫组化法和蛋白质印迹法观察在肌损伤后不同时机电针委中、肾俞穴对腰多裂肌损伤大鼠多裂肌中Foxo1、Myostatin、Myod蛋白表达的影响,阐明电针促进腰多裂肌损伤后修复的分子机制并筛选肌损伤后最佳的电针介入时机。研究方法将152只成年雄性SD大鼠随机分为空白组8只、电针组72只、模型组72只,其中电针组和模型组根据损伤后即刻干预、24h干预、48h干预三个不同介入时间点和1d、3d、7d三个不同的取材时间点各分为9个亚组;电针组、模型组大鼠选择双侧脊柱L4、L5水平两旁的四个点注射布比卡因以建立大鼠腰多裂肌损伤模型,空白组不做任何处理,正常饲养;电针组按照不同的针刺介入时间点选取双侧委中穴、双侧肾俞穴进行电针干预,连接韩式电针仪HANS-200A,2/100Hz的疏密波,电流强度1mA,持续20分钟,1次/天,直至取材的前一天,其对应的模型组进行同步的捆绑固定;于电针干预或捆绑固定后1d、3d、7d取材;用免疫组化法和蛋白质印迹法检测模型大鼠多裂肌组织中Foxo1、Myostatin、Myod表达的变化趋势。研究结果1.腰多裂肌Foxo1表达的变化蛋白质印迹法结果显示:1d取材,与空白组相比,24h模型组、48h模型组Foxo1蛋白表达升高(P0.05);与相应模型组比较,24h电针组Foxo1的蛋白表达降低(P0.05),即刻、48h针刺组Foxo1表达差异无统计意义(P0.05);与即刻、48h电针组相比,24h电针组Foxo1蛋白含量较低(P0.05)。3d取材,与空白组相比,24h、48h模型组Foxo1蛋白表达升高(P0.05),即刻模型组Foxo1蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与相对应的模型组相比,24h电针组Foxo1的蛋白表达降低(P0.01),即刻、48电针组Foxo1蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与即刻、48电针组相比,24h电针组Foxo1蛋白含量升高(P0.05)。7d取材,与空白组相比,24h、48h模型组Foxo1蛋白表达升高(P0.01),即刻模型组Foxo1蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与相对应的模型组相比,24h电针组Foxo1的蛋白表达降低(P0.01),即刻、48h电针组Foxo1的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);与48h电针组相比,24h电针组蛋白表达降低(P0.05)。免疫组化法结果显示:1d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Foxo1蛋白表达显著升高(P0.01);与相应的模型组相比,即刻、24h、48h电针组Foxo1蛋白表达降低(P0.05);与即刻电针组相比,24h电针组蛋白含量显著升高(P0.01);48h电针组蛋白表达显著升高(P0.01)。3d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Foxo1蛋白表达显著升高(P0.01);与相应模型组相比,24h电针组Foxo1的蛋白表达显著降低(P0.01),即刻、48h电针组Foxo1的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);与即刻、48h电针组相比,24h电针组Foxo1蛋白表达降低(P0.01)。7d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Foxo1蛋白表达显著升高(P0.01);与相应模型组相比,48h电针组Foxo1的蛋白表达显著降低(P0.01),即刻、24h电针组Foxo1的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);即刻、24h、48h电针组相比,各组间Foxo1蛋白表达差异无统计意义(P0.05)。2.腰多裂肌Myostatin表达的变化蛋白质印迹法结果显示:1d取材,与空白组相比,24h、48h模型组Myostatin蛋白表达降低(P0.05),即刻模型组Myostatin蛋白表达无差异(P0.05);与相应模型组相比,即刻电针组Myostatin的蛋白表达升高(P0.05),24h、48h电针组Myostatin的蛋白表达无差异(P0.05);与即刻电针组相比,24h、48h电针组Myostatin蛋白表达降低(P0.05)。3d取材,与空白组相比,即刻、48h模型组Myostatin蛋白表达降低(P0.05),24h模型组Myostatin蛋白表达显著升高(P0.01);与相应模型组相比,24h电针组Myostatin的蛋白表达显著降低(P0.01),即刻、48h电针组Myostatin的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);与48h电针组相比,24h电针组Myostatin蛋白表达降低(P0.05)。7d取材,与空白组相比,即刻、48h模型组Myostatin蛋白表达降低(P0.05),24h模型组Myostatin蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与相应的模型组相比,24h电针组Myostatin的蛋白表达显著降低(P0.01),即刻、48h电针组Myostatin的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);与即刻、48h电针组相比,24h电针组蛋白含量降低(P0.05)。免疫组化法结果显示:1d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Myostatin蛋白表达显著升高(P0.01);与相应模型组相比,24h电针组Myostatin的蛋白表达显著降低(P0.01),即刻、48h电针组Myostatin的蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与48h电针组比较,24h电针组Myostatin蛋白表达显著降低(P0.01)。3d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Myostatin蛋白表达显著升高(P0.01);与相应模型组相比,24h电针组Myostatin的蛋白表达降低(P0.05),48h电针组Myostatin的蛋白表达显著升高(P0.01),即刻电针组Myostatin的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);与48h电针组相比,24h电针组蛋白含量显著降低(P0.01)。7d取材,与空白组相比,即刻24h、48h模型组Myostatin蛋白表达升高(P0.05,P0.01);与相应的模型组相比,24h、48h电针组Myostatin的蛋白表达显著降低(P0.01),即刻电针组Myostatin的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);即刻、24h、48h电针组相比,三组间Myostatin的蛋白表达差异无统计意义(P0.05)。3.腰多裂肌Myod表达的变化蛋白质印迹法结果显示:1d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Myod蛋白表达显著升高(P0.01,P0.05);与相应模型组相比,即刻、24h电针组Myod的蛋白表达升高(P0.05,P0.01);与48h电针组相比,24h电针组Myod蛋白表达显著升高(P0.01)。3d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Myod蛋白表达升高(P0.05,P0.01);与相应的模型组相比,即刻、24h、48h电针组Myod的蛋白表达升高(P0.05);与即刻、48h电针组相比,24h电针组Myod蛋白表达显著升高(P0.01)。7d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Myod蛋白表达升高(P0.05);与相应的模型组相比,24h电针组Myod的蛋白表达显著升高(P0.01),24h、48h电针组Myod的蛋白表达差异无统计意义(P0.05);与即刻、48h电针组相比,24h电针组蛋白含量显著升高(P0.01)。免疫组化法结果显示:1d、3d、7d取材,与空白组相比,即刻、24h、48h模型组Myod蛋白表达升高均(P0.05);与相应的模型组相比,即刻、24h、48h电针组Myod的蛋白表达无差异(P0.05);即刻、24h、48h电针组三组间Myod的蛋白表达均无差异(P0.05)。研究结论布比卡因可以有效建立大鼠腰多裂肌损伤模型;电针可以通过下调Foxo1、Myostatin的表达,上调Myod的表达从而有效促进模型大鼠损伤多裂肌的修复;不同的针刺时机可以对针刺的效应产生影响,损伤后24h为电针介入的最佳时机。
【图文】：
不同电针介入时机对模型大鼠腰多裂肌损伤后Ｆｏｘｏｌ、Ｍｙｏｓｔａｔｉｎ、Ｍｙｏｄ表达的影响逡逑二腰椎旁开７ｍｍ），选用华佗牌０．３０Ｘ邋１３ｍｍ邋—次性针灸针，针刺后连接韩式电针ＨＡＮＳ－２００Ａ，邋２／ｌＯＯＨｚ的疏密波，电流强度１ｍＡ，，持续２０分钟，１次／天，直至取材的一天。在电针干预后的Ｉｄ、３ｄ、７ｄ各取材８只。（具体操作时间点参加下图）逡逑
４８ｈ模型组Ｆｏｘｏｌ的蛋白表达升高（ＰＣ０．０５）；８ｈ电针组Ｆｏｘｏｌ的蛋白表达差异无统计意义（Ｐ＞０．邋０５）逡逑与即刻电针组相比，２４ｈ电针组蛋白含量差异无统计学意义（Ｐ＞０．邋表达升高（Ｐ＜０．０５）邋；邋２４ｈ电针组与４８ｈ电针组相比，２４ｈ电针０．邋０５）。逡逑表１空白组、各模型组大鼠腰多裂肌Ｆｏｘｏｌ蛋白表达比较（ｆ邋士邋）逡逑空白组逦即刻模型组逦２４ｈ模型组逦４８ｈ模型组逡逑０．邋８６±０．邋０９逦１．０９±０．邋１７逦１．２４士０．２１＊逦１．邋１０±０．邋３２０．８６±０．０９逦１．０７±０．３１逦０．７９土０．１７＊逦１．６０±０．２６０．邋８６±０．邋０９逦０．邋９８±０．邋４９逦２．邋３６±０．邋８７林逦１．３３±０．邋４８相比Ｐ＜０．邋０５，邋＂邋Ｐ＜０．邋０１逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245;R-332
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6 方芳;方剑乔;刘U
本文编号：2669806
