从毒损脑络病机学说探讨α-syn蛋白在缺血性脑中风后的作用

发布时间：2020-05-19 14:43

【摘要】：目的:基于毒损脑络学说,通过制作大鼠永久性大脑中动脉阻塞模型(MCAO middle cerebral artery occlusion),观察缺血性脑卒中后应用清开灵注射液对α-syn、Tau、Bcl-2三种蛋白表达含量的影响,探求清开灵发挥脑保护作用的可能机制,为缺血性脑卒中的治疗寻找新的靶点。方法:将大鼠随机分为清开灵组、依达拉奉组、模型组、空白组并制作大鼠永久性大脑中动脉阻塞模型(MCAO middle cerebral artery occlusion),在造模手术后分别对清开灵组与依达拉奉组进行药物注射,4小时后进行第二次注射。24小时后进行行为学检测,并麻醉断头取脑,以HE染色观察脑皮质组织形态学变化。对脑皮质进行免疫组化统计α-syn蛋白阳性细胞数表达;对脑皮质与缺血半暗带采用蛋白免疫印迹法(Western blot),分别统计脑皮质与缺血半暗带α-syn蛋白、Tau蛋白、Bcl-2蛋白表达量;并探讨α-syn蛋白、Tau蛋白、Bcl-2蛋白三者间相关性。结果:1.MCAO模型大鼠行为鉴定:大脑中动脉阻塞术后,大鼠表现左侧前爪不能完全伸展,行走时向瘫痪侧甚至倾倒,小便失禁等症状表明模型成功。2.脑组织形态结构变化:取出完整大脑时,患侧脑部水肿膨大。脑组织形态MCAO组大鼠脑皮结构紊乱,排列极不规则,凋亡细胞可见核固缩及致密深染的核,细胞肿胀碎裂,神经纤维网呈海绵状,并且出现大量空泡;清开灵组大鼠可见缺血损伤,与模型组相比细胞数量较多,排列较整齐,神经纤维空泡较少,核不规则较少。3.α-syn蛋白结果:免疫组化:大鼠脑皮质α-syn蛋白阳性细胞数表达相对减少;清开灵组脑皮质α-syn蛋白阳性细胞表达数增加;Western blot结果:缺血半暗带中模型组与空白组相比,α-syn蛋白表达量升高,具有差异(P0.05);在皮质中模型组与空白组相比,α-syn蛋白表达降低,具有显著差异(P0.01);经清开灵与依达拉奉治疗后,缺血半暗带与皮质中α-syn表达量均升高且高于模型组,具有统计学意义。4.Tau蛋白结果:缺血半暗带/皮质模型组与空白组相比,Tau蛋白表达量升高,具有差异(P0.05);经清开灵与依达拉奉治疗后,缺血半暗带与皮质中Tau蛋白表达量均降低具有统计学意义。5.Bcl-2蛋白结果:缺血半暗带/皮质模型组与空白组相比,Bcl-2蛋白表达量升高,具有差异(P0.05);经清开灵与依达拉奉治疗后,半暗带与皮质中Bcl-2蛋白表达量均降低且低于模型组,具有统计学意义。6.α-syn蛋白、Tau蛋白、Bcl-2蛋白表达量及灰度值关系比较结果:α-syn蛋白与Tau蛋白:模型组中大鼠脑内α-syn蛋白与Tau蛋白含量均增加,经过治疗后大鼠半暗带及皮质中,随α-syn蛋白表达量的增高Tau蛋白表达量降低具有正相关的趋势。α-syn蛋白与Bcl-2蛋白:模型组中大鼠脑内α-syn蛋白与Bcl-2蛋白含量均增加,经过治疗后大鼠半暗带及皮质中,随α-syn蛋白表达量的增高Bcl-2蛋白表达量降低这具有负相关趋势。Tau蛋白与Bcl-2蛋白:模型组中大鼠脑内Tau蛋白与Bcl-2蛋白含量均增加,经过治疗后大鼠半暗带及皮质中,具有随Tau蛋白表达量的降低Bcl-2蛋白表达量降低这一趋势。结论:1.MCAO模型鼠在24小时后脑组织发生缺血损伤。2.帕金森致病标志性蛋白α-syn蛋白含量经清开灵治疗后明显升高,皮质缺血半暗带均有这一趋势,提示在本实验缺血性脑卒中后α-syn蛋白升高可能发生脑保护作用。3.阿尔茨海默病标志性致病蛋白Tau蛋白含量经清开灵治疗后降低,皮质缺血半暗带均有这一趋势,提示在本实验缺血性脑卒中后Tau蛋白含量降低可能减少细胞凋亡。4.抗凋亡基因Bcl-2蛋白含量经清开灵治疗后降低,皮质缺血半暗带均有这一趋势,提示在本实验中Bcl-2并未发挥抗凋亡作用,与以往实验结果不符合,其原因需进一步探讨。5.本实验经清开灵治疗后Tau蛋白含量随α-syn蛋白含量升高而降低,皮质缺血半暗带均有这一趋势,提示过高量的α-syn蛋白可能抑制Tau含量升高,从而减少缺血后细胞凋亡。6.本实验经清开灵治疗后Bcl-2蛋白含量随α-syn蛋白含量升高而降低,皮质缺血半暗带均有这一趋势,提示过高表达的α-syn蛋白抑制Bcl-2蛋白表达,两者间存在一定关系,与缺血性脑卒中细胞凋亡增多有相关性。7.本实验中经清开灵治疗后Bcl-2蛋白含量随Tau蛋白含量降低而降低,皮质缺血半暗带均有这一趋势,按照以往研究推测Tau蛋白降低并非通过Bcl-2蛋白发挥抗凋亡作用两者本实验中可能相关性不大。
【图文】：

图１蛋白配平标准曲线图逡逑（８）将样品标记分成两份，分装在１．５ｍｌ的离心管当中，冻存－８０°Ｃ冰箱，，实验时逡逑

清开灵组（ＨＥ邋Ｘ邋４００）逦依达拉奉组（ＨＥ邋Ｘ邋４００）逡逑图２邋ＭＣＡＯ大鼠脑皮质组织形态逡逑３．邋２免疫组化测定ＭＣＡ０大鼠脑皮质ａ邋－ｓｙｎ蛋白结果逡逑空白组大鼠皮质能见到较少数Ｍ的ａ邋＿ｓｙｎ阳性细胞数量表达；经过大
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R277.7

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本文编号：2671048