壮药壤笃岜总黄酮抑制鼻咽癌细胞株CNE-1作用的初步研究及安全性评价

发布时间：2020-06-21 23:08

【摘要】：目的:本课题通过体内和体外模型实验,探讨壤笃岜总黄酮作用于鼻咽癌细胞株CNE-1的增殖、克隆、划痕、迁移、侵袭、凋亡、周期和体内抗肿瘤的影响;采用western blot法检测相关蛋白的表达,初步阐明壤笃岜总黄酮作用于鼻咽癌细胞株CNE-1的作用机制;采用小鼠、大鼠灌胃给药法观察壤笃岜总黄酮进行长期和急性毒理性研究,评价其安全性;为提高壤笃岜总黄酮部位的利用价值和开发新药提供理论依据。方法:1.通过MTT法、单细胞克隆实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、细胞周期凋亡实验检测壤笃岜总黄酮(RDB)体外对人鼻咽癌细胞株CNE-1增殖能力、克隆能力、迁移能力、侵袭能力、凋亡和周期的影响,从而得出RDB对CNE-1细胞的影响。2.通过鼻咽癌裸鼠体内模型,对RDB体内抗鼻咽癌的疗效进行观察。3.通过western blot观察RDB是否改变相关蛋白的表达。4.通过对RDB的急性毒性实验和长期毒性实验来对RDB的安全性进行评价。结果:1.通过MTT法测定,RDB作用CNE-1细胞24h、48h、72h的IC_(50)分别为63.23μg/ml、54.50μg/ml、41.20μg/ml;通过单细胞克隆实验测定,RDB浓度为30μg/ml和60μg/ml时细胞克隆存活率分别为49.25%和22.5%;通过细胞划痕实验测定,48 h时30μg/ml和60μg/ml处理CNE-1细胞的愈合率分别为44.01±3.54%和37.96±2.32%;通过细胞侵袭实验的测定,72 h时RDB浓度为30μg/ml穿过小室的CNE-1细胞只有control组的28.3%,RDB浓度为60μg/ml穿过小室的CNE-1细胞只剩control组的1.1%;通过细胞凋亡实验测定,72 h时RDB浓度为60μg/ml作用CNE-1细胞后,其细胞凋亡率已达到55.58%。通过细胞周期的测定,经RDB处理过的CNE-1细胞其凋亡率显著上升,在G0/G1期中发生细胞阻滞。2.通过裸鼠体内实验测定,RDB对裸鼠体内的鼻咽癌细胞株CNE-1具有显著的抑制作用,RDB高、中、低剂量在给药21 d后的抑瘤率分别为52.15%±14.65%、40.61%±17.51%、37.89%±12.79%。3.通过western blot测定,RDB作用鼻咽癌细胞株CNE-1后可以使胞内的。4.通过对RDB进行的急性毒性实验和长期毒性实验测定,急性毒性实验过程中无小鼠死亡,给药结束后小鼠的肝脏病理切片也无明显的病变;长期毒性实验过程中大鼠长期服用RDB体重、各脏器指标和病理切片、血清指标中除钠离子外均正常。结论:1.RDB可以抑制鼻咽癌细胞株CNE-1的增殖和克隆,降低鼻咽癌细胞株CNE-1的迁移和侵袭能力,使细胞的周期阻滞在G0/G1,促进鼻咽癌细胞株CNE-1发生凋亡。2.RDB可以有效抑制裸鼠体内鼻咽癌CNE-1细胞的生长。3.经RDB处理过的鼻咽癌CNE-1细胞会通过bcl-2家族和caspase家族、p53信号途径,从而诱导鼻咽癌CNE-1细胞发生凋亡。4.通过对RDB的急性和长期毒性研究表明,RDB口服安全。
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R29
【图文】：

抑制率,细胞生长,细胞克隆,实验结果

图 1.1 RDB 对 CNE-1 细胞生长的抑制率注：*，与 control 组相比，p＜0.05，**，与 control 组相比，p＜0.013.2 细胞克隆实验结果

细胞克隆,抑制作用,细胞迁移,细胞的

图 1.2 RDB 对 CNE-1 细胞克隆的抑制作用注：*，与 control 组相比，p＜0.05，**，与 control 组相比，p＜0.013.3 细胞划痕实验结果为探讨 RDB 对 CNE-1 细胞迁移率的影响，我们通过细胞划痕来进行检测。研究结果表明，RDB 浓度为 30 μg/ml 和 60 μg/ml 时对CNE-1 细胞的迁移能力都起到了一定的抑制作用，且细胞迁移率和RDB 浓度成反比。24 h 时，经高、低浓度组处理的 CNE-1 细胞的愈合率分别为 18.38±2.80%和 22.76±2.68%，48 h 时，经高、低浓度组处理 CNE-1 细胞的愈合率分别为 37.96±2.32%和 44.01±3.54%，与control 组相比，均有统计学差异（P＜0.01）。结果如表 1.3 和图 1.3

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