针刺对慢性束缚应激焦虑模型小鼠肠道菌群影响的研究

发布时间：2020-06-22 18:10

【摘要】：焦虑症(Anxiety disorder,AD)分为慢性焦虑即广泛性焦虑(Generalized Anxiety Disorder,GAD)与急性焦虑,以焦虑情绪体验为主要特征。随着社会经济的高速发展,人们面临的问题逐渐增多,心理压力负担加重,从而使得焦虑症的发病率逐渐呈上升趋势,肠道系统作为人的“第二大脑”,参与人体多种生理活动,已有实验证明肠道菌群与焦虑存在一些联系,然而关于焦虑到底会引起肠道菌群如何变化的研究甚少,又因针刺在抗焦虑方面有着独特的优势,故本实验选择用慢性束缚应激法制备小鼠焦虑模型,采用针刺疗法,对焦虑模型小鼠的肠道菌群会产生的变化及针刺对焦虑模型小鼠肠道菌群的影响进行初探。目的通过研究针刺对焦虑模型小鼠行为学及肠道菌群结构与多样性的影响,探索针刺的抗焦虑效果及其对焦虑模型小鼠肠道菌群的调控作用。方法SPF级雄性C57BL6小鼠24只,适应性饲养一周后,按随机数字表法,分为四组-空白组、模型组、调神组、疏肝组,每组6只。采用慢性束缚应激法制备焦虑模型;调神组以每日针百会、印堂1次,留针1Omin,连续7日;疏肝组以每日针双侧合谷、太冲1次,留针10min,连续7日;第8日测黑白箱;第9日测高架十字迷宫;通过行为学测试记录小鼠在白箱中停留时间,进入开放臂次数占比(0E%)及开放臂停留时间(0T);用16S rDNA V3+V4区域高通量测序技术分析小鼠肠道菌群结构和多样性的变化情况。结果(1)白箱停留时间:与空白组相比,模型组小鼠在白箱停留时间缩短(P0.05);与模型组相比,调神组与疏肝组在白箱停留时间明显延长(p0.01);调神组与疏肝组相比,两组小鼠在白箱停留时间无统计学差异(p0.05)。(2)开放臂进入次数占比(0E%)与开放臂停留时间(0T):与空白组相比,模型组小鼠进入开放臂次数减少,但差异无统计学意义(P0.05),在开放臂停留时间明显缩短(p0.05);与模型组相比,调神组小鼠进入开臂次数占比显著增多(p0.05),小鼠在开放臂停留时间明显延长(P0.01);与模型组相比,疏肝组小鼠进入开臂次数增多,差异无统计学意义(p0.05),小鼠在开放臂停留时间延长(P0.01)。(3)群落结构组成分析:小鼠肠道菌群以拟杆菌门、厚壁菌门为主要组成,与空白组小鼠相比,在门水平上,模型组小鼠拟杆菌门占比降低,厚壁菌门占比升高,在属水平上,模型组小鼠毛螺菌科未确定菌属、拟杆菌属、瘤胃菌科属、另枝菌属、罗氏菌属所占比例升高,乳杆菌属、拟普雷沃菌属、Candidatus_Saccharimonas所占比例降低;与模型组小鼠相比,在门水平上,调神组与疏肝组使拟杆菌占比提升,厚壁菌占比降低,在属水平上,调神组毛螺菌科未确定菌属、拟杆菌属、拟普雷沃菌属所占比例降低,乳杆菌属、另枝菌属、罗氏菌属、Candidatus_Saccharimonas所占比例升高,疏肝组毛螺菌科未确定菌属、瘤胃菌科、拟普雷沃菌属所占比例降低,拟杆菌属、另枝菌属、罗氏菌属所占比例升高;LEfSe分析(LDA阈值为4)显示,与空白组相比,模型组Muribaculaceae、理研菌科、瘤胃菌科显著富集,差异明显,空白组,模型组与调神组与疏肝组分别比较,皆显示只在模型组中理研菌科显著富集,存在差异。(4)alpha多样性分析:alpha多样性分析表明,模型组小鼠较空白组小鼠observed-species指数及shannon指数均升高(p0.05),在observed-species指数上,与模型组相比,调神组有一定程度升高(p0.05),疏肝组较模型组升高明显(p0.05),在shannon指数上,与模型组相比,调神组及疏肝组皆有一定程度升高(p0.05)。(5)β多样性分析:基于Unweighted Unifrac距离PCoA分析,模型组及针刺组各样本在平面图的分布区域与空白组明显不同,相互距离较远,分界清楚,而针刺组与模型组所处区域有重叠,组间距离较近,调神组与疏肝组较模型组距离比空白组更接近。结论(1)针刺可有效改善焦虑模型小鼠焦虑样行为。(2)焦虑小鼠会产生肠道菌群结构紊乱及菌群多样性增加,针刺干预小鼠能够使小鼠紊乱的肠道菌群水平回调,且小鼠肠道内益生菌数量及菌群多样性增加。综上所述,针刺可能通过增加焦虑小鼠肠道内益生菌数量及菌群多样性,使差异菌群水平回调来缓解焦虑样行为。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245;R-332
【图文】：

氋架十字迷宫行为学中各组小鼠表现逡逑．１各组小鼠进入开放臂次数占比逡逑与空白组相比，模型组小鼠进入开放臂的次数占比有减少趋势，但无统计学差异逡逑（ｐ＞邋０．０５）；与模型组相比，调神组与疏肝组小鼠进入开放臂次数占比皆增多，其中逡逑神组小鼠进入次数占比增长趋势明显（Ｐ＜邋０．０５），疏肝组小鼠与模型组小鼠相比，逡逑异无统计学意义（Ｐ＞邋０．０５）；与调神组相比，疏肝组小鼠进入开放臂次数无明显差逡逑，差异无统计学意义（Ｐ＞邋０．０５）。见表３、图２逡逑表３各组小鼠进入开放臂次数占比比较（Ｊ土ｓ，邋ｎ＝６）逦？逡逑ｍｉ逦动物只数（只）逦０Ｅ（％）逡逑空白组逦６逦０．３４±０．０６逡逑模型组逦６逦０．２９邋±０．０９逡逑调神组逦６逦０．５０±０．邋１５ａ逡逑疏肝组逦６逦０．３９邋±０．１１逡逑

３．２各组小鼠在开放臂停留时间（０Ｔ）比较逡逑与空白组小鼠相比，模型组小鼠在开放臂停留时间明显缩短（Ｐ＜0．邋０５）；与模型逡逑组小鼠相比，疏肝组与调神组小鼠在开放臂停留时间明显延长（ｐ＜0．0１，ｐ＜0．0１）；逡逑与调神组相比，疏肝组小鼠在开放臂停留时间稍短，但并无统计学差异（Ｐ＞邋０．０５）。逡逑见表４、图３逡逑表４各组小鼠在开放臂停留时间比较Ｕ土ｓ，邋ｎ＝６）逡逑￣ｍ＼逦老鼠只数（只）逦０Ｔ邋（Ｓ）逡逑空白组逦６逦４０．５１邋＋邋６．０６逡逑模型组逦６逦２０．０３±２．２２＂逡逑调神组逦６逦６２．５０±９．４５１’逡逑疏肝组逦６逦６８．３８±３１．８４１＇逡逑注：与对照组相比，“ｐ＜邋０．０５；与模型组相比，＼＜邋０．０１逡逑

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本文编号：2726049