地槐消银颗粒治疗银屑病血热证的临床及实验研究

发布时间：2020-08-03 06:57

【摘要】：背景:银屑病是临床上常见的慢性皮肤病,严重影响患者身心健康。中医药对本病的认识有着悠久的历史,在历史演进中逐渐形成了从血论治的观点,并得到越来越多医家的认可,血热证是从血论治中最为常见的证型。地槐消银方在临床上应用多年,取得了较好的疗效,制作成颗粒剂后更加方便。目前关于中药治疗银屑病的机制探讨较多,磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号转导途径是当前的研究热点,不但在肿瘤的发病中有重要作用,在银屑病发病中也有重要作用。前期研究显示地槐消银颗粒可能通过本通路发挥作用。本研究主要验证地槐消银颗粒治疗银屑病血热证的临床疗效,并基于PI3K/Akt通路在动物和细胞层面进行机制研究。方法:临床研究:采用随机对照的观察方法,纳入符合银屑病血热证的患者72例,随机分为观察组和对照组。记录患者的一般资料、皮损PASI评分、中医证候评分。观察组给予地槐消银颗粒口服,对照组给予百癣夏塔热片口服,两组均外用医用凡士林。观察期为56天,治疗前后记录PASI评分及中医证候评分。观察地槐消银颗粒和百癣夏塔热片对于银屑病血热证PASI评分、中医证候评分、疗效等的影响,并计算各自的临床有效率。动物实验研究:通过外涂咪喹莫特建立诱导的银屑病样BALB/c小鼠模型,以地槐消银颗粒灌胃(分高、中、低剂量组),酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠外周血清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的含量,Western blotting及RT-PCR检测皮损组织PI3K、Akt蛋白及mRNA的表达水平,探讨地槐消银颗粒对银屑病样小鼠皮损、细胞因子、通路蛋白及基因等的影响。细胞实验研究:应用表皮生长因子(EGF)刺激人角质形成细胞(human adult low calcium temperature,HaCaT)24小时,添加PI3K/Akt信号通路的特异性阻滞剂LY294002干预1小时,制备实验所需的细胞模型。再以地槐消银颗粒(分高、中、低剂量组)分别干预经EGF刺激和加入抑制剂的HaCaT细胞模型,观察地槐消银颗粒对经EGF刺激后的及加入抑制剂的HaCaT细胞增殖、凋亡、细胞周期和IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α含量的影响,Western blotting及RT-PCR检测细胞PI3K、p-Akt、Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA的表达水平。结果:临床研究:给予观察组地槐消银颗粒治疗后,最后完成观察的共66例患者,各33例。观察组在治疗8周后有效率为87.88%,高于对照组的66.67%;其治疗后PASI评分明显低于对照组,有显著统计学差异(P0.01);在治疗后其中医证候改善优于对照组,有显著统计学差异(P0.01)。动物实验研究:1.地槐消银颗粒可以改善通过咪喹莫特造模的银屑病样小鼠的皮损状况,组织病理学表现主要是改善银屑病表皮增生及真皮血管增生、减轻炎症反应等;2.地槐消银颗粒可以抑制小鼠血清中IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌;3.通过对小鼠组织中PI3K mRNA及蛋白的测定,高剂量组效果最为明显,可以下调mRNA基因影响蛋白的生成,其发挥作用是通过PI3K/Akt途径实现,而对Akt mRNA及Akt蛋白均无影响。细胞实验研究:1.地槐消银颗粒可以抑制HaCaT细胞的增殖,加入通道抑制剂LY294002后其作用减弱,其抑制细胞增殖的作用通过PI3K/Akt通路实现;2地槐消银颗粒可以使细胞分裂停滞在G0-G1或者S期而使细胞无法增殖,同时可以增加细胞晚期凋亡率,这些影响在加入通道抑制剂LY294002后受到明显抑制;3.通过Western blotting及RT-PCR检测细胞PI3K、p-Akt、Akt蛋白及PI3K、Akt mRNA的表达水平,得出地槐消银颗粒可以通过下调PI3K mRNA水平进而降低PI3K蛋白的水平,加入通道抑制剂后这些效应消失。但对Akt蛋白和Akt mRNA均无影响。说明地槐消银颗粒通过下调PI3K mRNA水平进而影响PI3K蛋白的水平而发挥其作用;4.地槐消银颗粒可以抑制细胞因子IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌。PI3K/Akt通路在其中可能发挥了重要作用,这种效应明显体现在IL-2、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌上,而在抑制IL-6的分泌上可能通过多种途径发挥作用;5.地槐消银颗粒通过PI3K/Akt通路发生作用,对PI3K基因及蛋白均有影响,并通过这个通路影响细胞因子IL-2、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α的分泌水平而发挥治疗银屑病的作用。结论:1.地槐消银颗粒治疗银屑病血热证疗效肯定,能改善患者的皮损严重程度并能降低中医证候评分,未出现不良反应。2.地槐消银颗粒可以改善通过咪喹莫特造模的银屑病样小鼠的皮损状况,其机制是通过下调PI3K mRNA合成抑制蛋白生成、抑制细胞因子生成等实现的。3.地槐消银颗粒可以通过PI3K/Akt通路发挥抑制HaCaT细胞增殖作用,并可以下调PI3K mRNA、抑制PI3K及pAkt蛋白合成,同时可以抑制多种细胞因子的分泌。综上所述,地槐消银颗粒治疗银屑病血热证临床疗效确切,其具体作用机制可能是通过下调PI3KmRNA及蛋白合成,同时抑制多种细胞因子的分泌,从而发挥促进细胞凋亡、抑制增殖的作用。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R275.9
【图文】：

临床病例,年龄,情况,患者

最大年龄为５９岁，平均年龄４２．９１±１１．４７岁，对照组最小年龄２１岁，最大年龄５９岁，逡逑平均年龄４１．１８±９．２丨岁，两组年龄相比，差异没有统计学差异（Ｐ＞０．０５），提示两组年逡逑龄构成比具有可比性，见表２、图２。逡逑表１两组临床病例性别情况逡逑ｍｉ逦例数（ｎ）逦￣ｋ逦Ｉ逡逑观察组逦３３逦１４逦＼９￣逡逑对照组逦３３逦１５逦１８逡逑ｍ川逡逑２０逡逑；Ｉ■■国逡逑ＩＩ逦ＩＩ逡逑男逦女逡逑图ｉ两组临床病例性别对比情况逡逑表２观两组临床病例年龄情况（ｘ士ｓ邋）逡逑ｍ＼逦例数（ｎ）逦年龄（岁）逡逑观察组逦３３逦４２．９１±１１．４７逡逑对照组逦３３逦４１．１８±９．２１逡逑４７逡逑

临床病例,光化学疗法,用药情况,免疫抑制剂

２．１．２患者曾经治疗情况逡逑将两组的曾经用药情况各例数进行卡方检验比较，（Ｐ＞0．0５），提示两组患者曾经用逡逑药情况构成比具有可比性，见表３、图３。逡逑表３两组临床病例曾经治疗情况逡逑Ｈ逦ｉｌｌ邋免疫抑制剂类邋维甲酸类逦中药类逦光化学疗法逡逑（ｎ）逦（ｎ）逦（ｎ）逦（ｎ）逦（ｎ）逡逑观察组逦５逦７逦４逦３０逦２１逡逑对照组逦８逦６逦３逦２８逦１９逡逑ｙ２逦０．８６２逦０．０９６逦０．邋１６逦０．邋５６９逦０．２５４逡逑Ｐ逦０．３５３逦０．７５７逦０．６８９逦０．４５１逦０．６１４逡逑０经治疗怙况比较逡逑｜｜邋Ｉ，逡逑ｌ0逦■■逦■■逦■观察－组逡逑：ｌｌ邋ＩＩ邋Ｉ．邋Ｉ

临床病例,病程,积分,患者

观察组３３例患者中，病程最长者１２０个月，最短者１个月，平均２４．４８±３２．９４月，逡逑对照组３３例患者中，病程最长者１２０个月，最短者１月，平均２５．０３±３０．２９月。两组逡逑对比，不具有统计学差异（Ｐ＞0．0５），提示两组在病程构成比具有可比性，见表４、图４。逡逑表４两组临床病例病例病程情况（ｘ土ｓ邋）逡逑ＥＪｌ逦例数（ｎ）逦病程（月）逡逑￣观察组逦３３逦２４．４８±３２．９４逡逑对照组逦３３逦２５．０３±３０．２９逡逑岕逡逑７０逡逑６０逡逑５０逡逑４０逡逑＿观察组逡逑３０逦＿对照组逡逑：■逦■逡逑观察组逦对照组逡逑图４两组临床病例病程情况逡逑２．１．４患者治疗前ＰＡＳＩ积分逡逑观察组治疗前ＰＡＳＩ邋ｆ均积分为１５．８０±丨０．７５，对照组治疗前ＰＡＳＩ平均积分为逡逑１４．０７±９．４５，两组比较，没有统计学差异，（Ｐ＞０．０５），提示两组在冶疗前ＰＡＳ丨枳分无逡逑明显差异，具有可比性，见表５、图７。逡逑表５两组临床病例治疗前ＰＡＳ１积分情况（ｉ土ｓ邋）逡逑ｍｉ逦例数（ｎ）逦ＰＡＳ１积分逡逑治疗组逦３３逦１５．８０１１０．７５逡逑对照组逦３３逦１４．０７±９．４５逡逑４９逡逑

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