【摘要】：目的:(1)观察艾灸对胃癌大鼠肿瘤生长的抑制作用;(2)探讨艾灸对胃癌组织中HSP70合成、释放的影响;(3)从HSP70对免疫功能的影响出发,观察艾灸对胃癌大鼠免疫功能的影响。方法:60只健康SPF级SD大鼠(200~240g)编号后,按随机数字表法随机选出10只作为空白组(A组)。随机选择12只通过手术模拟瘤体移植过程,成功后,随机选取10只分入假手术组(B组)。剩余38只采用Walker256癌细胞诱发的皮下癌组织移植胃部制备胃癌模型。7日后随机选取8只验证造模成功,剩余30只随机分入模型组(C组),艾灸组(D组)、红外组(E组),每组10只。艾灸组采用直径7mm艾条隔日交替悬灸中脘、关元、足三里(双)及脾俞(双)、胃俞(双)。红外组采用波长0.4~3μm的红外线隔日交替照射胃脘部及背部T11-T13区域。艾灸组、红外组每次治疗20分钟,1天1次,连续21天。空白组、假手术组、模型组在同一时间陪同抓取、捆绑固定。治疗期间观察动物一般状况,进行生存状态积分。治疗结束,禁食不禁水12小时后,摘眼球采血,流式细胞计量术测定外周血中淋巴细胞凋亡、T细胞活化、CD3~+CD4~+、CD~+3CD8~+、CD4~+CD25~+、CD8~+CD28~+、CD8~+CD28~-T细胞比例。处死动物,无菌条件下剖开胸腔、腹腔,称取、计算胸腺及脾脏指数,观测肿瘤生长及转移,PCNA及TUNEL法测定胃部瘤体内癌细胞的增殖与凋亡,ELISA法测定血清中HSP70的表达,免疫组化、ELISA及RT-PCR法测定胃癌组织中HSP70、HSP70 mRNA表达。细胞因子微阵列芯片筛选胃癌组织中组间表达差异较大的细胞因子,进一步用ELISA法测定其含量。结果:(1)与模型组比较,艾灸组大鼠生存状态改善,治疗15日后生存状态积分明显增高(P0.01);胃部瘤体体积增长被抑制(抑制率为41.89%),癌细胞向胃粘膜及腹腔脏器侵袭较少;胃癌组织内增生的血管较少,坏死灶较多,癌细胞增殖少、凋亡多(均P0.01)。与模型组比较,红外组大鼠生存状态稍改善,治疗15日后生存状态积分稍高于模型组(P0.05),胃部瘤体体积增长稍受抑制(抑制率为28.09%),癌细胞向多个腹腔脏器转移,胃癌组织内大量血管,癌细胞增殖较少,凋亡较多(均P0.01)。与红外组比较,艾灸治疗15日后,艾灸组大鼠生存状态积分增加更明显(P0.05),胃部瘤体内癌细胞增殖更少,凋亡更多(均P0.05)(2)与模型组比较,艾灸组大鼠血清中HSP70的含量增加(P0.01),胃癌组织内HSP70及HSP70 mRNA表达水平增加(均P0.01),HSP70多表达于细胞外的组织间隙中。与模型组比较,红外组大鼠血清中HSP70的含量显著增加(P0.01),胃癌组织内HSP70含量、HSP70 mRNA的表达增加(均P0.05)。与红外组比较,艾灸组大鼠胃癌组织内HSP70含量、HSP70 mRNA的表达更高(均P0.05),HSP70更多表达于细胞外(P0.05)。(3)与空白组比较,模型组大鼠胸腺、脾脏指数明显增加(均P0.01);外周血中活化淋巴细胞比例增加,凋亡淋巴细胞比例减少(均P0.05);外周血中CD3~+、CD3~+CD8~+、CD8~+CD28~+、CD8~+CD28~-T细胞比例明显增加(均P0.01),CD4~+CD25~+T细胞稍增加(P0.05),CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值明显降低(P0.01)。与模型组比较,艾灸组大鼠胸腺、脾脏指数明显增加(均P0.01);外周血中活化淋巴细胞比例增加,凋亡淋巴细胞比例减少(均P0.05);外周血中CD3~+、CD3~+CD4~+、CD8~+CD28~+T细胞比例明显增加(均P0.01),CD3~+CD8~+T细胞、CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值增加(均P0.05),CD4~+CD25~+、CD8~+CD28~-T细胞比例下降(均P0.05);胃癌组织内Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ含量增加(P0.01,P0.05),Th2型细胞因子IL-6、IL-22含量减少(均P0.05)。与模型组比较,红外组大鼠脾脏指数增加(P0.05);外周血中CD8~+CD28~+T细胞比例增加(P0.05),CD4~+CD25~+T淋巴细胞比例减少(P0.01);胃癌组织内Th1型细胞因子TNF-α含量增加(P0.05),Th2型细胞因子IL-6含量减少(P0.05)。与红外组比较,艾灸组大鼠胸腺指数增加(P0.05),外周血中活化淋巴细胞比例增加,凋亡淋巴细胞比例减少(均P0.05),CD3~+、CD3~+CD4~+T细胞比例明显增加(均P0.01),CD3~+CD8~+、CD8~+CD28~+T细胞比例稍增加(均P0.05);胃癌组织内Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ含量增加(均P0.05)。结论:(1)艾灸能一定程度抑制胃癌大鼠肿瘤的生长及转移,减少癌细胞增殖,促进其凋亡。(2)艾灸能诱导胃癌大鼠肿瘤细胞内HSP70的合成及细胞外释放。(3)艾灸能提高胃癌大鼠免疫器官指数、活化淋巴细胞,激活并调节T细胞亚群,纠正Th1/Th2细胞因子失衡,促进了胃癌大鼠的免疫功能。
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245.81
【图文】：
皮下实体瘤（左）、胃部瘤体（右）HE染色观察（×400倍）
图 1-3 癌细胞腹水、肝脏、小肠、脾脏转移体体积增长抑制率间内无动物死亡。干预结束处死动物，开腹探查后发现模型组均有瘤体破溃消失，其中模型组 1 例、艾灸组 6 例、红外组 3灸组、红外组分别仍有 9 只、4 只、7 只胃上仍长有瘤体。各
D 艾灸组 E 红外组图 1-5 各组大鼠胃黏膜形态（HE，如图 1-6 所示，模型组胃癌组织内血管较多，坏死内血管少，坏死灶较多；红外组胃癌组织内内有一定坏
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本文编号：2800446
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