基于体内、外活性成分追踪的蒙药森登-4药效物质基础研究

发布时间：2020-09-15 12:55

　　 目的:在课题组前期研究的基础上,对蒙药森登-4中化学成分进行分离纯化及富集。对蒙药复方森登-4的体内药效成分进行研究。采用小鼠肉芽肿实验、耳肿胀实验以及扭体反应实验研究蒙药森登-4对小鼠的抗炎镇痛作用。采用氧嗪酸钾制作大鼠高尿酸血症模型,研究森登-4的降尿酸作用。采用紫外可见分光光度法对森登-4正常大鼠和风湿性关节炎模型大鼠的血清中总黄酮和总萜的含量进行研究,并探索其在血清中的移行情况;对森登-4正常大鼠和风湿性关节炎模型大鼠的尿液中总黄酮和总萜的含量进行研究,确定总黄酮和总萜对风湿性关节炎模型大鼠的治疗作用。采用UPLC-Q-TOF-MS法分析正常大鼠、风湿性关节炎模型大鼠关节中的京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷和栀子苷的含量,并研究药-时曲线,为蒙药复方森登-4的药理药效研究提供依据。方法:将蒙药森登-4制成有效部位,采用大孔树脂柱,硅胶柱,MCI柱,凝胶柱洗脱,得不同流分,对其中的杨梅素、(2R,3R)-双氢杨梅素、槲皮素、栀子苷、京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷、没食子酸进行有目标的追踪。取180只小鼠,分别进行棉球致小鼠肉芽肿实验,二甲苯致小鼠耳肿胀实验,醋酸致小鼠扭体反应实验。观察蒙药森登-4各给药组与模型空白组及阳性对照组的肉芽肿增值重量差异,耳片炎症肿胀度抑制差异和小鼠的扭体抑制差异。将大鼠随机分为正常组和高尿酸血症模型组,采用ELISA法测定各组大鼠血清和尿液中的尿酸(UA)水平。将大鼠分为正常组和风湿性关节炎模型组,灌胃给予蒙药森登-4有效部位,给药后取大鼠尿液及不同时间点血清,经除蛋白处理及显色反应后,采用紫外分光光度法对大鼠血清及尿液中的总黄酮及总萜成分进行测定,计算含量,并进行血清药代动力学研究。将大鼠分为正常组、风湿性关节炎模型组,灌胃给予蒙药森登-4有效部位后,取大鼠关节的乙腈提取液,采用UPLC-Q-TOF-MS法对提取液中的京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷和栀子苷进行测定。结果:从蒙药森登-4中分离富集得到足量的6个化合物,经薄层色谱、液相色谱指认和~1H-NMR和~(13)C-NMR波谱数据对比,确认为杨梅素,(2R,3R)-双氢杨梅素,栀子苷,京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷,槲皮素,没食子酸。蒙药复方森登-4中剂量组能抑制棉球致小鼠肉芽肿的生长,可以抑制二甲苯致小鼠耳肿胀,可以抑制冰醋酸引起的小鼠扭体反应,表明蒙药复方森登-4有显著的抗炎镇痛作用。对大鼠血清及尿液进行UA检测,并比较模型对照组和给药组的UA水平,结果表明,蒙药森登-4有降尿酸作用。建立了紫外可见分光光度法测定大鼠血清中总黄酮和总萜含量的方法,并对总黄酮和总萜的药代动力学进行了初步研究。采用UPLC-Q-TOF-MS法,测定了大鼠关节中京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷和栀子苷的含量。结论:蒙药复方森登-4具有显著的抗炎镇痛和降尿酸作用,与其在临床上治疗风湿性关节炎、痛风的用途相对应。对蒙药森登-4体内药效成分的研究表明,复方所含有的总黄酮和总萜在治疗风湿性关节炎的过程中存在重要意义,并通过UPLC-Q-TOF-MS法对其进行萜类质量标志物:京尼平-1-O-β-D-龙胆二糖苷和栀子苷的验证,为蒙药森登-4的药理药效研究提供了有力依据。
【学位单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R29
【部分图文】：

槲皮素 杨梅素 (2R,3R)-双氢杨梅素 栀子苷 京尼平-1-O-β-D 没食子酸-龙胆二糖苷图 2-1 各化合物与对照品共薄层图如图采用 HPLC 法对纯化得到的化合物进行指认，结果如图 2-2 所示。0 5 10 15 20 25 30 35 40minmAU-50050100150200250300350MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000079.D)0 5 10 15 20 25 30 35 40minmAU-50050100150200250300350MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000082.D)0.2480 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20minmAU-30-20-100102030MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000072.D)0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20minmAU-50050100150200250300MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000073.D)槲皮素对照品和化合物 1 杨梅素对照品和化合物 20 5 10 15 20minmAU-18-16-14-12-10-8-6-4MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000099.D)MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000076.D)0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5minmAU-50-40-30-20-100102030MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000109.D)MWD D, Sig=254,16 Ref=关闭 (赵\三种姜找峰000110.D)

-1正常组和模型组大鼠药-时曲线

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本文编号：2818987