艾灸对荷瘤胃癌大鼠骨骼肌消耗的治疗作用与机制探讨

发布时间：2020-09-19 08:53

　　 目的:(1)观察艾灸对胃癌大鼠恶病质进程的影响。(2)从腓肠肌肌重及肌细胞形态变化、肌细胞凋亡探讨艾灸对胃癌恶病质大鼠骨骼肌消耗的治疗作用。(3)从艾灸对腓肠肌内促炎因子TNF-α与IL-6、泛素蛋白连接酶MAFbx与MuRF-1的影响,阐明艾灸治疗胃癌恶病质骨骼肌消耗可能的机制。方法:健康SPF级SD大鼠50只,按照随机数字表法随机选出10只分入空白组(A组)。随机选择12只通过手术模拟瘤体移植过程,成功后,随机将10只作为假手术组(B组)。剩余28只采用Walker256瘤组织胃部黏贴制备胃癌模型,造模第7天后随机选取3只验证胃癌造模成功,剩余25只继续观察体质量变化7天,参考人体恶病质状态的分级,当胃癌大鼠体质量减少至空白组的95%时,随机分入模型组(C组),艾灸组(D组),每组10只。从造模第15天起,艾灸组予以隔日交替温和灸①中脘、关元、足三里②脾俞、胃俞两组穴位。同期空白组、假手术组和模型组进行陪同抓取、捆绑固定。各组每次干预20min,每天1次,连续干预14天。期间观测各组大鼠体质量、摄食量。治疗结束后,处死动物,测量其去脏器体质量、剖取左侧腓肠肌组织测量肌重、HE染色观测腓肠肌形态变化(测算肌细胞横径)、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观测腓肠肌细胞凋亡,剖取右侧腓肠肌组织酶联免疫吸附法(ELISA)检测腓肠肌组织中TNF-α及IL-6含量,蛋白质印迹法(Western Blot)检测腓肠肌组织中MAFbx与MuRF-1的表达量。结果:(1)造模前,各组大鼠摄食量、体质量无统计学差异(P0.05)。与空白组大鼠比较,胃癌造模12天起,造模大鼠摄食量减少,差异具有统计学意义(P0.01);体质量逐步下降,差异具有统计学意义(P0.05)。在艾灸组大鼠治疗期间,与空白组比较,模型组大鼠的摄食量持续减少(P0.01);至艾灸6日时,与模型组大鼠比较,艾灸组大鼠摄食量较模型组增加明显(p0.05),艾灸14日后,艾灸组大鼠摄食量显著高于模型组大鼠(P0.01)。同时,艾灸期间,艾灸6日起,艾灸组大鼠体质量开始回升,艾灸组大鼠的体质量开始高于模型组(P0.05)。艾灸治疗14日后,与模型组比较,艾灸组大鼠体质量显著增加(P0.01)。(2)与空白组大鼠比较,模型组大鼠去脏器体质量显著下降(P0.01),腓肠肌质量明显降低(P0.01);艾灸组大鼠腓肠肌肌重稍降低(P0.05);模型组大鼠肌细胞间有大量炎性细胞浸润,肌纤维横径明显缩小(P0.01),腓肠肌肌纤维细胞凋亡比率增加(P0.01);经艾灸治疗14日后,艾灸组大鼠去脏器体质量显著升高(P0.01),腓肠肌组织结构较完整,肌细胞排列较密,炎性细胞浸润较少,肌纤维横径明显大于模型组(p0.05),腓肠肌肌纤维细胞凋亡比率减少(P0.05)。(3)与空白组大鼠比较,假手术组腓肠肌组织中TNF-α、IL-6细胞因子含量无差异(P0.05);模型组大鼠腓肠肌组织中TNF-α、IL-6细胞因子含量升高(P0.01),MAFbx蛋白表达水平升高(P0.01),MuRF-1蛋白表达水平也有升高(P0.05),提示进入恶病质状态。经艾灸治疗14日后,与模型组比较,艾灸组大鼠腓肠肌组织中TNF-α、IL-6细胞因子含量降低(P0.05),MAFbx与MuRF-1的蛋白表达水平均有降低(P0.05)。结论:(1)艾灸对胃癌恶病质大鼠骨骼肌消耗具有治疗作用,表现为增加骨骼肌肌重,改善病理变化、减少肌细胞凋亡。(2)艾灸对胃癌恶病质大鼠骨骼肌消耗的治疗作用与减少肌组织中促炎因子TNF-α、IL-6及泛素蛋白连接酶MAFbx与MuRF-1的表达以抑制肌炎性反应、减少蛋白降解有关。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R245.81
【部分图文】：

ｘｍ，？１ｇ逡逑ＳＤ大鼠的左前肢的腋下及右后肢的腹股沟处，每只０．５ｍｌ。７天后，肉眼可见注射逡逑处已形成约２ｃｍ３大小的皮下瘤，高凸隆起、质地坚硬。逡逑③瘤组织胃部黏贴移植：脱颈椎法处死皮下荷瘤大鼠，无菌条件下剥离皮逡逑下肿瘤，剔除坏死瘤块组织，选择生长良好的鱼肉样瘤组织，切成２ｘ２ｘ２ｍｍ３大逡逑小的瘤组织块。１０％水合氯醛（３ｍｌ／ｌｋｇ）腹腔麻醉待移植的体质量１８０？２２０ｇ的逡逑ＳＤ大鼠，仰卧位固定于鼠板，无菌条件下开腹找到胃组织，夹取一块２ｍｍ３的瘤逡逑组织置于胃大弯皮区与腺区交界的胃壁上，无菌纱布吸干胃壁上体液后用５ｕｌ血逡逑红蛋白吸管吸取１邋ｉｌｌ医用组织粘合胶滴在瘤组织附着处，将瘤组织与胃壁固定。逡逑完成后，将黏贴有瘤组织的胃回置于腹腔内，逐层缝合关腹。逡逑胃癌造模成功评价：瘤组织胃部黏贴移植７天后，处死动物，无菌条件下剖逡逑开腹腔，观察原瘤体黏贴处形成直径ｌｃｍ以上的瘤体，表面光滑，边界清晰，粘连及脏器侵犯，表明胃癌造模成功。ＨＥ染色结果也表明，胃部瘤体与皮下实逡逑体瘤同源。逡逑

３．结果逡逑３．１大鼠摄食量逡逑如图２所示，造模前，各组大鼠摄食量无统计差异（Ｐ＞0．0５）。与空白组动逡逑物比较，造模大鼠摄食量的减少于造模１２ｄ起，差异具有统计学意义（尸＜0．0５）。逡逑在艾灸组动物治疗期间，与空白组比较，模型组大鼠的摄食量持续减少，差异显逡逑著（ＰＣ０．０１）。与模型组比较，艾灸组动物的摄食量在艾灸后缓慢增加，艾灸６逡逑曰后（造模２０ｄ），摄食量较模型组增加明显（ＰＣ０．０５），艾灸１４日后（造模２８ｄ），逡逑摄食量显著高于模型组动物（Ｐ＜０．０１）。逡逑４０ｔ逡逑＋空白组逡逑３０－逦＋假手术组逡逑Ｓ逦＾邋ｍ邋ｎ逦＋壚组逡逑Ｉ２０＇逦＋邋艾灸组逡逑塑邋１０－逡逑＊邋＊逡逑图２各组大鼠摄食量变化情况（ｎ＝１０）逡逑注：与空白组比较，＞＜０．０５，邋＞＜０．０１；与模型组比较，Ｖ＜０．邋０５，，＜０．邋０１逡逑３．２大鼠体质量逡逑如图３所示，造模前，各组大鼠体质量无统计差异（Ｐ＞0．0５）。造模１２天起，逡逑与空白组比较，造模动物体质量开始下降，差异明显（Ｐ＜０．0５），体质量下降逡逑至空白组的９５％

注：与空白对照组比较，ＡＡ／°＜0．邋０１，与模型组比较，４Ａ／°＜0．0１。逡逑３．４大鼠腓肠肌肌重比较逡逑如图４及表３所示，与空白组比较，模型组大鼠腓肠肌重量显著降低（Ｐ＜０．０１），逡逑艾灸组大鼠腓肠肌肌重稍降低（尸＜０．０５）；与模型组比较，艾灸组大鼠腓肠肌逡逑重量明显增加０．０５）。逡逑１３逡逑

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