针刺对去卵巢大鼠骨密度及肠黏膜跨膜钙转运相关受体表达的影响

发布时间：2020-11-08 17:02

　　 目的:观察针刺对去卵巢大鼠骨密度及钙离子转运相关受体的影响,探讨针灸防治骨质疏松症的机制。方法:3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和电针组,每组8只。模型组和电针组大鼠行双侧卵巢摘除术。电针组交替给予"关元"+"三阴交"(双)和"肾俞"+"后三里"(双)电针干预,每次电针20 min,每日1次,每周连续干预5 d,共12周。12周后用骨密度仪统一测定右侧胫骨、股骨骨密度;采用荧光定量PCR及Western blot法检测肠黏膜内瞬时感受器电位香草酸受体5(TRPV5)、瞬时感受器电位香草酸受体6(TRPV6)、钠钙交换体1(NCX1)和细胞膜钙离子三磷酸腺苷水解酶(PMCA1b)及与钙离子细胞旁转运相关的紧密连接蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白occludin和claudin mRNA和蛋白的表达水平。结果:与空白组、假手术组比较,模型组大鼠骨密度明显降低(P0.05);与模型组比较,电针组骨密度明显提高(P0.05)。与空白组、假手术组比较,模型组肠黏膜内TRPV6、NCX1 mRNA表达上调(P0.01),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin的mRNA表达明显下调(P0.01);与模型组比较,电针组肠黏膜TRPV6、 NCX1 mRNA的表达明显下调(P0.01,P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1和occludin的mRNA表达水平均上调(P0.01,P0.05)。与空白组、假手术组比较,模型组TRPV6、NCX1蛋白表达量升高(P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表达量显著降低(P0.05);与模型组比较,电针组TRPV6和NCX1的表达量降低(P0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论:电针能提高去卵巢大鼠的骨密度,增强参与钙离子吸收跨细胞途径的TRPV5、 PMCA1b的mRNA和蛋白表达以及细胞旁途径ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达,这可能是针灸防治骨质疏松症的机制之一。
【部分图文】：

与空白组、假手术组比较,模型组肠黏膜TRPV6、 NCX1 mRNA的表达明显上调(P<0.01),TRPV5、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin mRNA明显下调(P<0.01)。与模型组比较,电针组TRPV6、NCX1 mRNA的表达明显下调(P<0.01,P<0.05),TRPV5、PMCA1b、ZO-1和occludin mRNA的表达明显上调(P<0.01,P<0.05)。见图2。图2 各组大鼠肠黏膜TRPV5 、TRPV6、NCX1、PMCA1b、ZO-1、occludin、claudin mRNA表达比较 ( x - ±s,8 只鼠/组)

图1 各组大鼠胫骨、股骨的骨密度比较 ( x - ±s,8 只鼠/组)2.3 各组大鼠肠黏膜中TRPV5、TRPV6、NCX1、PMCA1b、ZO-1、occludin和claudin蛋白表达的比较

PMOP主要是由于绝经后雌激素(E2)水平降低,E2对破骨细胞的抑制作用减弱,破骨细胞形成增多,活性增加,骨形成受到抑制,导致骨吸收功能增强[14]。研究[15-16]表明,TRPV5在E2介导的破骨细胞形成、骨吸收活性和破骨细胞凋亡中起主导作用,TRPV6-/-小鼠可出现肠道钙离子吸收障碍、体质量下降和骨密度下降等问题。TRPV5参与肾小管Ca离子的再吸收,而TRPV6参与肠道Ca离子的摄取,这些通道是促钙激素调节的主要目标[17]。肠腔内钙离子经上皮细胞顶端膜中特异的TRPV5、TRPV6通道转运到细胞内,进入细胞内的钙离子与calbindin结合并弥散到细胞基底膜,最后,通过膜上的NCX1和钙离子ATP泵通道,把钙离子转运到细胞外[18-19]。这是钙离子吸收的主要形式,它和细胞旁途径共为钙离子的吸收形式。细胞旁途径过程是钙离子通过肠上皮细胞之间的主要由ZO-1、occludin和claudin等蛋白构成的紧密连接而进入细胞外间隙[20-21]。该结构允许小的分子或离子自由通透,因而钙离子通过紧密连接是一个被动的、非饱和的、不需要消耗能量的扩散过程[22]。从以上钙离子的整个吸收过程可以看出,TRPV5、TRPV6、calbindin-D等共同介导了钙离子的跨细胞转运,ZO-1、occludin和claudin等则共同介导了钙离子的细胞旁途径转运,这些蛋白在肠钙的吸收过程中各自发挥着非常重要的作用[21]。任何因素干扰或影响了这些基因或蛋白,均会影响钙的吸收和转运,从而影响骨代谢而导致骨质疏松症的发生。
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