基于病证结合探讨血瘀证糖尿病肾病大鼠肾损害与内质网应激的关系

发布时间：2020-11-18 05:39

　　目的:观察血瘀证对糖尿病肾病(DKD)大鼠的肾损害以及对内质网应激(ERS)的影响,探讨DKD血瘀证大鼠肾损害与ERS之间的关系。方法:选用50只SPF级雄性SD大鼠,用高脂高糖饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法建立DKD大鼠模型。随机分为正常组、糖尿病组、糖尿病+血瘀证组,其中糖尿病+血瘀证组(0.05 mg·kg-1)采用右旋糖酐法制备。观察各组大鼠一般情况、血液流变学指标,24 h尿蛋白含量、肌酐、肾脏病理学变化;免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),活化转录因子6(ATF6)和肾脏纤维化指标纤维连接蛋白(FN),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,糖尿病组大鼠出现多饮多食多尿、体质量减轻,血液流变学指标全血黏度和血浆黏度均明显升高(P0.05,P0.01),24 h尿蛋白含量、肌酐、尿素氮显著上升(P0.01),肾脏病理加重,肾组织的GRP78,ATF6,FN和α-SMA的mRAN及蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);经过右旋糖酐法制备血瘀证模型后,糖尿病+血瘀证组大鼠死亡率增加,体征变化较糖尿病组更加明显,全血黏度、血浆黏度,24 h尿蛋白含量、肌酐、尿素氮等较糖尿病组显著升高(P0.01),同时病理改变较糖尿病组加重,肾组织的GRP78,ATF6,FN,α-SMA的mRNA及蛋白表达较糖尿病组明显升高(P0.05,P0.01)。结论:在病证结合模型下,血瘀证可能明显加重糖尿病肾病大鼠肾脏病理损害,且与增强糖尿病肾病大鼠肾脏组织的ERS有关。
【部分图文】：

血瘀证,病理,糖尿病,肾小球

对大鼠肾组织切片进行HE,Masson,PAS染色。其中正常组大鼠肾小管、肾小球无病理变化，肾脏组织正常。HE染色中，与正常组比较，糖尿病组大鼠出现系膜基质增生、基底膜增厚和肾小球萎缩，细胞外基质可见大量炎性细胞浸润；糖尿病+血瘀证组较糖尿病组整体加重，见图1。Masson染色中，与正常组比较，糖尿病组可见蓝色胶原物沉积，肾小球中可见细胞增生及胶原纤维，肾间质纤维化，肾小球毛细血管管壁显著增厚，肾小球系膜、基底膜可见紫红色物质沉积；与糖尿病组比较，糖尿病+血瘀证组则颜色沉积更为明显，纤维化表现更重，见图2。PAS染色中，与正常组比较，糖尿病组大鼠肾小球系膜、基底膜以及肾小管均可见淋巴细胞浸润，呈紫红色，病变程度较为严重；与糖尿病组比较，糖尿病+血瘀证组大鼠肾小球系膜、基底膜以及肾小管均可见大量淋巴细胞浸润，紫红色分布较多，同时近曲小管扩张，管腔变大，表明有大量糖原物质积累，见图3。图2 血瘀证对大鼠肾组织病理的影响（Masson，×400)

血瘀证,病理