苗药小花清风藤叶内生真菌Alternariaenuissima的鉴定

发布时间：2021-01-16 00:13

　　目的:活化已分离保存的苗药小花清风藤叶内生真菌L-43,对其进行形态学及分子鉴定。方法:对内生真菌L-43活化后,观察其在PDA固体培养基上的菌落形态,采用显微鉴定法观察内生真菌L-43的孢子及菌丝形态,参照《中国真菌志》对其形态进行描述;结合PCR及NCBI数据库对比分析方法构建系统进化树,最终确定内生真菌L-43的种属。结果:菌种L-43与链格孢属Alternaria tenuissima聚为一类,相似度为100%,表明L-43为链格孢属Alternaria tenuissima。结论:苗药小花清风藤叶中存在链格孢属种类的内生真菌,为后续研究提供宝贵微生物资源。 

【文章来源】：科学技术创新. 2020,(23)

【文章页数】：2 页

【部分图文】：

菌L-43的ITS系统进化树

列扩增，扩增后将PCR扩增片段进行测序。结果在NCBI数据库BIAST对比已知种属的ITS序列进行相似性分析，再运用MEGA5.0分析其系统发育，构建进化树，而后进行数据处理和生物多样性分析[9]。3结果与分析3.1小花清风藤叶内生真菌L-43的形态学菌株L-43在PDA平板生长7d时，单菌落表面不平，表面蓬松，菌丝丝绒状，菌落中间灰色，外围白色，无渗出液。主要显微形态特征菌丝较细，链状，直或弯曲，有分支，分生孢子单生、呈梨形，分隔明显且无规律。根据菌株L-43的形态学特征将其鉴定为Alternariatenuissima（链格孢属）（图1）。A.菌落形态B.菌丝及孢子形态C.液体发酵图1内生真菌L-43的形态特征3.2小花清风藤叶内生真菌L-43分子鉴定内生真菌L-43经ITS区经引物V9D和LS266扩增、PCR产物测序得到934bp的rDNA序列。将所测内生真菌L-43的扩增产物序列输入NCBI中进行Blast序列比对分析，筛选出与内生真菌L-43种属最相似的序列，并用MEGA5.05软件构建系统进化树，结果显示，在进化树中，内生真菌L-43与AlternariatenuissimaKJ082100聚类在同一分支（图2），亲缘关系最为接近，结合在GenBank中登录结果显示二者相似度为100%，同时，结合L-43的形态学特征，最终将菌株L-43鉴定为Alternariatenuissima（链格孢属）。图2菌L-43的ITS系统进化树4讨论实验结果发现分子生物学鉴定后为一个种属的的几种菌出现了生长形态和显微形态不同的情况，此种情况该以形态学鉴定为主还是以分子生物学为主。有学者认为，此种情况该一分子生物学鉴定结果来判断其种属。内生真菌的形态易受温度、时间、培养基等培养条件的影响，从而导致其鉴定结果的影响；分子生物学鉴定及反映了内生真菌的分类地位，又反映了其进化水平和与其他生物的亲缘关系[10]。总之

【参考文献】：
期刊论文
[1]一株具有抑菌活性的平榛内生真菌的鉴定[J]. 周永强,余佳佳,孔德静,胡娟,陈群英,赵春丽,周英.  山西农业大学学报(自然科学版). 2019(06)
[2]我国清风藤属药用植物研究概况[J]. 张雪晴,李曼姝,李玉玲,张学学,卢顺光,温秀凤,胡建忠,邹坤.  生物资源. 2018(06)
[3]药用植物内生真菌研究现状和发展趋势[J]. 郭顺星.  菌物学报. 2018(01)
[4]植物内生菌及其代谢产物的药学研究进展[J]. 江曙,陈代杰,陶金华,戈梅.  中国生化药物杂志. 2008(06)
[5]植物内生菌与道地药材的相关性研究[J]. 江曙,钱大玮,段金廒,严辉,于光.  中草药. 2008(08)
[6]内生菌与天然药物[J]. 黎万奎,胡之璧.  中国天然药物. 2005(04)
[7]植物内生菌研究新进展[J]. 邹文欣,谭仁祥.  植物学报. 2001(09)

硕士论文
[1]狭叶柴胡悬浮细胞及内生真菌活性成分抗肿瘤研究[D]. 周永强.黑龙江中医药大学 2014
[2]水仙内生真菌的分离纯化及其次生代谢产物生物活性研究[D]. 姚广玉.兰州理工大学 2011



本文编号：2979772