藏药螃蟹甲中苯乙醇苷类成分抗高原缺氧作用及机制研究

发布时间：2017-04-27 13:05

  本文关键词：藏药螃蟹甲中苯乙醇苷类成分抗高原缺氧作用及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:筛选藏药螃蟹甲中具有抗高原缺氧活性的成分,研究其抗高原缺氧药理作用及相关机制。方法:1、通过采用模拟急性高原环境缺氧大鼠模型,从螃蟹甲水提取物、螃蟹甲水洗脱物和螃蟹甲苯乙醇苷中筛选抗缺氧活性部位和最佳给药剂量,研究其抗缺氧药理作用。2、研究螃蟹甲抗高原缺氧活性成分的药理作用及相关机制。建立模拟高原环境缺氧大鼠模型,Wistar大鼠随机分为六组:常氧空白组(Normoxia),缺氧模型组(Hypoxia),药物低、中、高组和阳性药物地塞米松组,常氧空白组和缺氧模型组均给予等体积的灭菌注射用水,药物组的给药剂量分别为50 mg·kg-1·d-1、200 mg·kg-1·d-1、400 mg·kg-1·d-1,以上给药方式均为灌胃(i.g.)给药,连续7天。分别从缺氧大鼠脑组织、肺组织的保护作用,免疫系统,氧化应激系统、炎症反应等方面研究其药理作用及相关机制,所选指标主要包括:缺氧大鼠的一般生存状态,外周血象指标,脑组织和肺组织的含水量,脑组织和肺组织的SOD活性、GSH活性,MDA、IL-1β,TNF-α和VEGF的含量,血清中IL-1β、TNF-α和VEGF的含量,脑组织和肺组织中IL-1β、TNF-α、VEGF、IL-6和HIF-1αmRNA的相对表达量以及脑组织中IL-1β、TNF-α、VEGF和NF-κB蛋白的相对表达,并制作缺氧大鼠脑组织和肺组织的病例切片图,观察其病理变化。结果:1、螃蟹甲具有良好的抗高原缺氧作用,其有效部位是螃蟹甲苯乙醇苷(PhGCs),其主要含有毛蕊花糖苷。2、螃蟹甲PhGCs(400 mg·kg-1,i.g.)能改善缺氧大鼠一般生存状态,主要有摄食摄水频率增加,自主活动加强,精神状态改善,毛发顺有光泽,呼吸频率减缓;从外周血象指标来看,PhGCs能显著改善缺氧大鼠的血液成分,增加缺氧大鼠血液携氧能力,降低血液中白细胞、红细胞、血红蛋白、淋巴细胞、中性粒细胞等的数量,说明螃蟹甲PhGCs能有效提高缺氧大鼠免疫系统功能,从而缓解由于缺氧而导致的损伤。3、螃蟹甲PhGCs(400 mg·kg-1,i.g.)能明显使缺氧大鼠脑组织、肺组织中SOD活性、GSH活性升高,MDA含量下降;同时,PhGCs能显著改善缺氧大鼠脑组织和肺组织水盐代谢,降低脑含水量和肺含水量,减少脑水肿和肺水肿的发生;病理学结果也显示螃蟹甲PhGCs能够保护缺氧时大鼠脑组织、肺组织的细胞结构及细胞水肿。4、螃蟹甲PhGCs(400 mg·kg-1,i.g.)能够明显降低缺氧大鼠血清中IL-1β、TNF-α和VEGF的含量;同时,螃蟹甲PhGCs能明显降低缺氧大鼠脑组织、肺组织中IL-1β、TNF-α和VEGF的含量。5、螃蟹甲PhGCs(400 mg·kg-1,i.g.)能明显下调缺氧大鼠脑组织、肺组织中IL-1β、TNF-α、VEGF、IL-6和HIF-1αmRNA的相对表达;同时,螃蟹甲PhGCs(400 mg·kg-1,i.g.)能够降低缺氧大鼠脑组织中IL-1β、TNF-α、VEGF和NF-κB蛋白的相对表达。结论:1、螃蟹甲具有良好的抗高原缺氧作用,其抗高原缺氧活性部位PhGCs主要含毛蕊花糖苷。2、螃蟹甲PhGCs能够明显缓解模拟急性高原缺氧造成的脑功能和肺功能损伤,其机理可能是通过清除自由基、改善水盐代谢、抗氧化应激相关。3、螃蟹甲PhGCs能够明显缓解模拟急性高原缺氧造成的脑功能和肺功能损伤,其机理也可能是通过抑制NF-κB介导的炎症信号通路,下调脑组织和肺组织中IL-1β、TNF-α、VEGF、IL-6和HIF-1αmRNA表达以及脑组织中IL-1β、TNF-α、VEGF和NF-κB蛋白表达的分子机制,显著降低血脑屏障的通透性,减轻水肿程度和保护脑组织神经元,从而起到保护作用。
【关键词】：螃蟹甲 苯乙醇苷类成分 高原 抗缺氧 氧化应激 炎症反应 NF-κB
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R29
【目录】：

• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 符号说明13-14
• 前言14-15
• 立题依据15-21
• 1. 高原脑水肿的发病机制研究现状15
• 2. 炎症的启动、放大、失控是HACE产生的重要原因15-17
• 3. 以HIF-1α/NF-κB是炎症的放大、失控的关键17-19
• 4. 本课题研究的主要内容和技术路线19-21
• 第一章 藏药螃蟹甲抗高原缺氧活性成分筛选及机制探讨21-46
• 摘要21-22
• 1. 实验材料22-23
• 1.1 实验动物22
• 1.2 实验试剂22-23
• 1.3 实验仪器23
• 2. 实验方法23-30
• 2.1 藏药螃蟹甲水提取物及不同组分的分离制备23-24
• 2.2 高效液相色谱法（HPLC）测定螃蟹甲乙醇洗脱物中的苯乙醇苷类成分24-26
• 2.3 实验动物与分组26
• 2.4 高原脑水肿和高原肺水肿大鼠模型的制备及给药26-27
• 2.5 样本取材27
• 2.6 大鼠脑组织和肺组织含水量的测定27-28
• 2.7 大鼠脑组织和肺组织病理学的制备和观察28
• 2.8 大鼠脑组织和肺组织氧化应激指标的检测28
• 2.9 大鼠血清中炎症相关因子的检测28
• 2.10 大鼠脑组织和肺组织中炎症相关因子的检测28-29
• 2.11 统计学处理29-30
• 3. 结果30-44
• 3.1 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠脑组织含水量的影响30-31
• 3.2 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠肺组织含水量的影响31-32
• 3.3 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠脑组织病理学变化的影响32-33
• 3.4 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠肺组织病理学变化的影响33-34
• 3.5 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠脑组织氧化应激指标的影响34-36
• 3.6 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠肺组织氧化应激指标的影响36-38
• 3.7 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠血清中炎症因子的影响38-40
• 3.8 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠脑组织中炎症因子的影响40-42
• 3.9 螃蟹甲提取物对模拟高原缺氧大鼠肺组织中炎症因子的影响42-44
• 4. 讨论44-46
• 第二章 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原环境缺氧大鼠脑组织损伤的保护作用及机制研究46-74
• 摘要46-47
• 1. 实验材料47-49
• 1.1 实验动物47
• 1.2 实验试剂47-48
• 1.3 实验仪器48-49
• 2. 实验方法49-59
• 2.1 实验动物与分组49
• 2.2 高原脑水肿大鼠模型的制备及给药49
• 2.3 样本取材49
• 2.4 大鼠血常规的检测49-50
• 2.5 大鼠脑组织含水量的测定50
• 2.6 大鼠脑组织病理学的制备和观察50
• 2.7 大鼠脑组织中氧化应激指标的检测50
• 2.8 大鼠血清中炎症相关因子的检测50
• 2.9 大鼠脑组织中炎症相关因子的检测50
• 2.10 Real-time RT-PCR检测大鼠脑组织中相关炎症基因的表达50-56
• 2.11 Western Blotting检测大鼠脑组织中相关炎症蛋白的表达56-58
• 2.12 统计学处理58-59
• 3. 结果59-71
• 3.1 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠生存状态的影响59
• 3.2 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠血常规的影响59-61
• 3.3 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠脑组织含水量的影响61-62
• 3.4 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠脑组织病理学变化的影响62-63
• 3.5 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠脑组织中氧化应激指标的影响63-65
• 3.6 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠血清中炎症因子的影响65-66
• 3.7 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠脑组织中炎症因子的影响66-67
• 3.8 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠脑组织中炎症基因表达的影响67-69
• 3.9 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠脑组织中炎症蛋白表达的影响69-71
• 4. 讨论71-74
• 第三章 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原环境缺氧大鼠肺组织损伤的保护作用及机制研究74-91
• 摘要74-75
• 1. 实验材料75-76
• 1.1 实验动物75
• 1.2 实验试剂75-76
• 1.3 实验仪器76
• 2. 实验方法76-78
• 2.1 实验动物与分组76
• 2.2 高原肺水肿大鼠模型的制备及给药76
• 2.3 样本取材76
• 2.4 大鼠血常规的检测76-77
• 2.5 大鼠肺组织含水量的测定77
• 2.6 大鼠肺组织病理学的制备和观察77
• 2.7 大鼠肺组织中氧化应激指标的检测77
• 2.8 大鼠血清中炎症相关因子的检测77
• 2.9 大鼠肺组织中炎症相关因子的测定77
• 2.10 Real-time PCR检测大鼠肺组织中炎症相关基因的表达77
• 2.11 Western Blotting检测大鼠肺组织中NF-κB蛋白的表达77
• 2.12 统计学处理77-78
• 3. 结果78-89
• 3.1 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠生存状态的影响78
• 3.2 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠血常规的影响78-80
• 3.3 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠肺组织含水量的影响80-81
• 3.4 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠肺组织病理学变化的影响81-82
• 3.5 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠肺组织中氧化应激指标的影响82-84
• 3.6 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠血清中炎症因子的影响84-85
• 3.7 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠肺组织中炎症因子的影响85-86
• 3.8 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠肺组织中炎症基因表达的影响86-88
• 3.9 螃蟹甲苯乙醇苷对模拟高原缺氧大鼠肺组织中NF-κB蛋白表达的影响88-89
• 4. 讨论89-91
• 结语91-93
• 1. 研究结论91
• 2. 研究结果的意义91-92
• 3. 研究展望92-93
• 参考文献93-100
• 附录100-102
• 文献综述102-113
• 参考文献108-113
• 致谢113-114
• 在学期间主要研究成果114-117

【参考文献】

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  本文关键词：藏药螃蟹甲中苯乙醇苷类成分抗高原缺氧作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：330649