QuEChERS-HPLC-MS/MS法对生物样品植物毒素的分析检测

发布时间：2021-06-24 00:04

　　有毒植物及植物毒素种类繁多,由植物毒素中毒引发的案件和事故常有发生。在此类案事件中,血液、尿液、组织等生物样品中植物毒素的检测是中毒诊断或相关案事件认定的关键,因此,建立生物样品中常见植物毒素快速灵敏的检测方法具有重要意义。本文基于改进的QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）前处理方法,结合高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）,分析血液、肝脏、尿液中常见的24种植物毒素,即金雀花碱、毒扁豆碱、莨菪碱、东莨菪碱、山莨菪碱、钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己、欧夹竹桃甙乙、欧夹竹桃甙、雪上一枝蒿甲素、秋水仙碱、次乌头碱、新乌头碱、乌头碱、颠乌头碱、卡茄碱、茄碱、雷公藤吉碱、雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤定碱、士的宁、马钱子碱。试验工作及其结果如下:1.本文建立了可同时一次性进样并分析上述24种植物毒素的HPLC-MS/MS方法,采用多反应监测模式（MRM）扫描,离子对定性,标准曲线法定量。2.本文建立了针对常见三种生物样品（血液、尿液、肝脏）的QuEChERS样品前处理方法,可有针对性的处理上述三种生物样品,提取并分析上述2... 

【文章来源】：中国人民公安大学北京市

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

24种植物毒素的提取离子色谱图

在乙腈中分别添加体积分数为0.1%、0.2%的甲酸或乙酸后,经过震荡离心后上层清液泛红且浑浊,即对血液检材的净化并不理想,难以沉淀血液中的色素蛋白,见下图3.1。分析其原因可以发现,血液中细胞较多,且有大量如红细胞这类含有色素的体细胞,在加入含有有机酸的萃取剂后,机体细胞膜以及细胞器膜会被有机酸破坏,其内部的色素蛋白等会渗透到基质液中,使基质产生变色,对仪器分析不利。进一步实验发现,相比与乙腈离心后沉淀结块,当使用萃取剂为甲醇或丙酮时,血液离心后的沉淀物更加细腻和均匀,但各种植物毒素回收率均不高,可能是由于多数植物毒素在乙腈和血液的分配情况优于甲醇、丙酮和血液中的分配情况,由于丙酮会影响液相色谱中的连接塑胶管,使其老化变脆,不利于仪器的维护,因此本实验尝试考察乙腈和甲醇组合作为提取剂的提取回收率情况,分别考察φ5%、φ10%、φ15%、φ20%甲醇乙腈溶液,但结果发现提取回收率并无明显提升,且配制溶液较为费时费力。因此,本实验最终选择提取回收率较高,且沉淀蛋白效果最好的乙腈作为DLLME阶段的萃取剂。

仅通过甲醇进行提取的肝脏上清液虽较为澄清无明显浑浊,但清液显黄色且有气味。但在甲醇中加入0.1%（体积比）的甲酸后,上清液变得稍有浑浊混浊,颜色成棕红色,见图3.2。而在甲醇中加入0.1%（体积比）的乙酸后,上清液虽然未变浑浊,但上清液颜色成浅红色,见图3.3。原因为肝脏细胞数量大,酸性条件下,肝脏组织被酸溶解,细胞膜、细胞器膜与细胞器被酸破坏,大量破碎的细胞器、色素、蛋白质等物质流入基质液,导致基质更为复杂,甚至变得浑浊,不利于净化[111],其中肝脏中的血红蛋白因为细胞被破坏也释放到基质之中,这是加入两种有机酸后上层液体变为棕红色或红色的原因。图3.3肝脏经乙酸提取剂提取后离心效果图


本文编号：3245930