PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因:溺死诊断方法

发布时间：2017-07-03 08:08

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【摘要】：目的建立嗜水气单胞菌gyr B和16SrRNA基因PCR毛细管电泳检测方法,探讨它们在淡水溺死诊断中的应用价值。方法提取人、18种浮游生物(白色念珠菌、嗜水气单胞菌及16种藻类),以及经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的30例尸体(其中生前淡水溺死28例,陆地自然死亡2例)的组织样本的DNA(肺、肝、肾各1份/例),分别使用引物AH(gyr B基因)及引物Ah(16SrRNA基因)进行扩增,扩增产物用毛细管电泳法检测。结果人、白色念珠菌、16种藻类DNA扩增后毛细管电泳检测结果均为阴性,而嗜水气单胞菌结果均为阳性,其产物大小分别为195 bp,350 bp。分别利用引物AH和Ah对28例淡水溺死尸体样本肺、肝、肾进行PCR毛细管法进行检测,嗜水气单胞菌的检出率:AH分别为96.4%,71.4%,60.7%;Ah分别为75.0%,42.9%,32.1%,计算得到溺死者的体循环脏器中嗜水气单胞菌检验的总阳性率分别为82.1%,53.6%,2例陆地自然死亡案件尸体样本检测结果均为阴性。两对引物AH与Ah对嗜水气单胞菌检出率有显著性差异(P0.05)。结论 PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyr B基因用于诊断淡水溺死灵敏度较高,可作为诊断的辅助性方法;联用16SrRNA基因可提高该菌的检出率,增强MDVF-Auto SEM法诊断淡水溺死的证据力。
【作者单位】： 广东工业大学轻工化工学院;广州市刑事科学技术研究所公安部法医病理学重点实验室;
【关键词】： 法医病理学 溺死 嗜水气单胞菌 PCR毛细管电泳
【基金】：广东省公益研究和能力建设项目(2015A020217001) 公安部计划研究项目(2015JSYJA03)
【分类号】：D919
【正文快照】： 目前,法医学鉴定溺死的方法主要包括尸体剖检、硅藻检验以及浮游细菌检验等[1]。其中剖检尸体鉴定溺死主要依据一些溺死的典型特征进行判断,包括逝者口、鼻及呼吸道中出现白沫、肺肿大、胸膜积液以及胸膜下出血等,但是若尸体已高度腐败,上述特征则不明显甚至不存在,因而死因难

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