棉花农杆菌活体转化方法及其在棉籽品质改良上的应用

发布时间：2017-11-09 12:36

  本文关键词：棉花农杆菌活体转化方法及其在棉籽品质改良上的应用

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【摘要】：棉花是我国重要的经济作物。作为一种优质的天然纤维,棉纤维是纺织业的重要原料。除此以外,棉花也是一种重要的油料作物,棉籽中含有大量的蛋白质和脂肪,这使得棉籽成为生产蛋白质和食用油等的潜在资源,棉籽的营养品质也逐渐成为研究的热点,改良和利用棉籽的营养品质性状是棉花育种的重要目标。本研究以高油基因VgDGAT1a为目的基因,以具有自主知识产权的抗草甘膦基因(EPSPS-G6)为植物筛选标记基因,通过农杆菌活体转化技术将表达载体转入受体棉花植株-中棉所49中,获得转基因植株,并经过一系列的自交纯化,获得纯化转基因种质系-T3种子,采用无损分析技术-近红外光谱分析技术对转基因种质系进行营养品质的分析,评价转VgDGAT1a棉花种质系的利用价值。主要研究结果如下： 1.利用已经构建的带有VgDGAT1a目的基因和植物筛选标记(抗潮霉素基因-hyp)的植物表达载体pCAMBIA1301,用具有自主知识产权的草甘膦抗性基因EPSPS-G6替代表达载体自带的抗潮霉素基因hyp,重新构建表达载体。 2.将重组质粒pCAMBIA1301-VgDGAT1a+EPSPS-G6转入农杆菌EHA105中,利用农杆菌活体转化技术将其转入棉花植株中,收获转化种子共1268g。 3.用20mmol/l的草甘膦对拟转化幼苗进行筛选,获得转基因植株共125株,自交后获得T1种子,继续进行草甘膦筛选和严格自交,并经PCR鉴定和Southern blot检测确定,最终获得51个纯合转VgDGAT1a基因的种质系。 4.对51份纯合转基因种质系和非转基因对照系进行种子营养品质的无损分析,与对照组相比,转VgDGAT1a种质系棉籽的油分含量提高,平均为32.70%;蛋白质含量降低,平均为45.18%；氨基酸含量也都降低。转基因种质系的蛋白质与油分负相关关系并没有改变,即转入VgDGAT1a基因提高棉子中含油量,但降低了其蛋白质的含量,同时也降低了其氨基酸的含量。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S562

【参考文献】

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本文编号：1161940