应用亲和超滤—液质联用技术筛选中药靶酶抑制剂

发布时间：2017-12-17 18:22

  本文关键词：应用亲和超滤—液质联用技术筛选中药靶酶抑制剂

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【摘要】：医学上常用酶抑制剂来治疗因酶异常表达所引起的人类疾病。我国中药资源丰富,从中药中筛选低毒、高效的靶酶抑制剂,对发现创新药物先导化合物、创制具有自主知识产权的新药具有重要意义。传统的分离筛选方法复杂耗时、选择性差,严重制约了中草药活性成分的快速发现。亲和超滤-液质联用(AS/UF-LC-MS)技术具有灵敏度高、分析快速,集活性筛选与结构鉴定于一体等优点,目前主要用于组合化学库中活性成分的筛选,但在中药提取物活性成分筛选中应用较少。本研究发展基于亲和超滤-液质联用技术筛选中草药中靶酶抑制剂,为中草药复杂体系中靶酶抑制剂的快速筛选、鉴别提供新思路、新方法。1.亲和超滤-液质联用技术筛选中草药中乙酰胆碱酯酶抑制剂实验采用了电鳗乙酰胆碱酯酶作为靶酶,AChI为底物,DTNB为显色剂,SDS为反应终止剂,采用酶标仪比色法对49种药材的粗提物进行了乙酰胆碱酯酶抑制活性评价,筛选出效果较好的四种粗提物-黄柏80%乙醇提取物、元胡80%乙醇提取物、丹参乙酸乙酯提取物和黄连80%乙醇提取物,并测定其半抑制浓度。通过对亲和超滤孵育条件、色谱条件进行优化,建立针对乙酰胆碱酯酶特性亲和超滤-液质联用体系。并使用建立好的体系从黄连80%乙醇提取物中筛选鉴定出具有显著抑制效果的化合物5个。采用半制备液相制备活性化合物,通过质谱和核磁技术对其进行鉴定,分别为非洲防己碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、黄连素。采用比色法测定其半抑制浓度IC50值,分别为25.09,37.86,20.64,13.90和48.51 mg L-1。2.中草药中酪氨酸酶抑制剂的筛选实验采用蘑菇酪氨酸酶为靶酶,L-DOPA为底物,采用酶标仪进行微量酶活性抑制评价,从21种中药的粗提物中筛选出酪氨酸酶抑制效果较好的粗提物,如:牡丹皮80%乙醇提取物,甘草乙酸乙酯提取物,苦参乙酸乙酯提取物,桑白皮乙酸乙酯提取物。并测定其半抑制浓度IC50值分别为:746.20,62.18,63.82和210.17 mg L-1。中药提取物的自由基清除能力可以拮抗络氨酸酶的活性,本研究对筛选到的具有较好络氨酸酶抑制活性的中药提取物进行了自由基清除能力检测,其IC50值分别为:45.55,298.87,1096.6和992.27 mg L-1。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R283.6

【引证文献】

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 于能江;赵毅民;郭继芬;任凤霞;;利用亲和超滤和HPLC-DAD-ESIMS技术寻找中草药提取物中的抗炎活性成分[A];第八届全国中药和天然药物学术研讨会与第五届全国药用植物和植物药学学术研讨会论文集[C];2005年

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本文编号：1301108