梅花鹿黏膜病同源灭活疫苗的制备与免疫效果检测

发布时间：2018-05-03 01:19

本文选题：梅花鹿黏膜病 + 灭活疫苗　；参考：《吉林大学》2014年硕士论文

【摘要】：牛病毒性腹泻/黏膜病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）是单链正股RNA病毒，是黄病毒科瘟病毒属的代表病毒，与同属内的猪瘟病毒和羊边界病毒，在血清学上有交叉反应。梅花鹿黏膜病由牛病毒性腹泻/黏膜病病毒引起的一种以发热、黏膜糜烂溃疡、免疫耐受与持续感染、免疫抑制、怀孕母鹿流产、产死胎或畸形胎为主要特征的一种接触性传染病，该病广泛流行于世界各国，严重影响养鹿业健康发展。在。黏膜病在梅花鹿群中呈蔓延扩散的趋势，但针对梅花鹿黏膜病专用疫苗在我国仍尚属空白，很多情况下使用牛源的疫苗进行替代，使用牛源的疫苗进行梅花鹿黏膜病的免疫效果也不尽如人意。同时，已经有报道证明，怀孕期的母畜进行BVDV弱毒疫苗的免疫可能会导致流产或者死胎。综上所述，应该创制一种具有自主知识产权的梅花鹿专用灭活疫苗，使梅花鹿黏膜病免疫预防工作更加科学化。为此，本试验在成功分离到梅花鹿源牛病毒性腹泻病毒的基础之上，使用MDBK细胞对BVDV病毒进行培养并回收。多次回收后，使用超速离心进行浓缩，留存为下一步毒种制备使用。为了确定所收获的病毒，使用了倒置显微镜观察和RT-PCR两种检测方法来进行鉴定，结果显示无误，其中RT-PCR条带大小为326bp，上述病毒液的制备符合兽医生物制品相关规程的要求。应用蚀斑技术对病毒进行了纯化筛选，得到了相对单一、稳定的克隆株，作为毒种进行下一步的制备。为了确保疫苗的安全性，进行了外源病毒的检验。通过实验确定了灭活灭活剂甲醛的总浓度为1.5‰，灭活时间为36h。灭活后与40%氢氧化铝胶混合制备了疫苗，进行了无菌检验。按照我国相关规定，对制备的梅花鹿黏膜病灭活疫苗进行了无菌检验、安全检验、效力检验等，，结果均合格。为了检测本疫苗的免疫效果，对本源动物鹿进行免疫，使用间接ELISA方法进行抗体效价水平的检测，检测结果证明本疫苗可以诱使鹿产生比较明显的免疫应答。通过本试验研究表明，制备的梅花鹿黏膜病灭活疫苗质量好、安全性高、实际应用性强，为这一领域的研究打下了基础。
[Abstract]:Bovine viral diarrhea / mucosal virus ( BVDV ) is a single - stranded positive strand RNA virus , which is a representative virus of the genus Flaviviridae , which has cross - reactivity with swine fever virus and sheep boundary virus in the same genus .

In conclusion , it has been proved that the vaccination of BVDV attenuated vaccine can lead to abortion or stillbirth . In conclusion , it is necessary to create a special inactivated vaccine of Cervus nippon with independent intellectual property , so as to make the immune prevention work of sika deer mucosal disease more scientific .

In order to ensure the safety of the vaccine , the virus was purified and screened . The results showed that the vaccine could induce the deer to produce a relatively simple and stable vaccine . The results showed that the vaccine could induce the deer to produce a relatively single and stable vaccine .

【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：S855.3

【参考文献】