禽白血病病毒抗原/抗体ELISA检测方法的建立及准种分析

发布时间：2020-12-21 21:19

　　禽白血病（Avian leukosis）是制约养禽业发展的主要禽类传染病,以垂直传播为主,免疫污染禽白血病病毒（Avian leukosis virus, ALV）的活疫苗也是引发该病的重要原因之一。目前主要通过定期对鸡群进行ALV血清学监测,采取淘汰净化的方法控制该病。我国开展ALV血清学监测通常使用美国IDEXX等公司的检测试剂盒,检测成本高、推广范围窄。因此,研究开发具有自主知识产权的ALV检测试剂盒,降低ALV检测成本,扩大鸡群检测范围,对我国防控本病有重要的实际应用意义。另外,ALV-J在临床上自报道以来一直处于不断的变异中,当前尚无确切证据证明ALV-J在我国鸡群中致病作用有多样性的机制,而病毒准种的多样性很有可能是ALV-J致病作用多样性的机制之一。因此,开展ALV准种研究对于从分子水平上解析ALV-J在我国不同鸡群中致病作用的多样性具有重要的理论意义。本研究通过原核表达ALV p27蛋白,制备抗p27蛋白多克隆抗体,建立了ALV抗原ELISA检测方法和ALV抗体ELISA检测方法。试验结果表明,建立的两种检测方法与禽常见传染病病毒或其阳性血清、大肠杆菌阳性血清无交叉反应... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
插图与附表清单
缩略词表
第一章 引言
    1 禽白血病概况
        1.1 病原学
        1.2 流行病学
        1.3 临床特征和病理变化
        1.4 禽白血病的检测和诊断
        1.5 预防和控制
    2. 病毒的准种及其演变
        2.1 准种的特性
        2.2 准种的作用
        2.3 准种的研究方法
    3 本研究的目的与意义
第二章 禽白血病病毒P27蛋白在大肠杆菌中的表达和多克隆抗体的制备
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 RT-PCR扩增结果
        2.2 重组克隆载体的构建与鉴定
        2.3 重组表达质粒的双酶切鉴定
        2.4 P27蛋白在大肠杆菌中的诱导表达
        2.5 表达蛋白的纯化
        2.6 表达蛋白的WESTERN-BLOTTING鉴定
        2.7 兔抗P27蛋白抗体的效价测定
        2.8 兔抗P27蛋白抗体的纯化
        2.9 兔抗P27抗体的酶标化结果
    3 讨论
    4 小结
第三章 禽白血病病毒抗原ELISA检测方法的建立
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 双抗体夹心ELISA相关试验条件的确定
        2.2 阴阳性临界值的确定
        2.3 特异性试验
        2.4 敏感性试验
        2.5 重复性试验
        2.6 符合率试验
        2.7 保存期试验
        2.8 临床试验
    3 讨论
    4 小结
第四章 禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 间接ELISA相关试验条件的确定
        2.2 阴阳性临界值的确定
        2.3 特异性试验结果
        2.4 敏感性试验结果
        2.5 重复性试验结果
        2.6 符合率试验结果
        2.7 保存期实验结果
    3 讨论
    4 小结
第五章 禽弱毒疫苗中ALV的分离鉴定及其全基因组序列分析
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 三种活疫苗中ALV的分离鉴定
        2.2 三株ALV全基因组的克隆测序
        2.3 分离毒株GP85基因的序列分析与亚群鉴定
        2.4 分离毒株与不同亚群参考毒株主要基因区域的同源性比较
    3 讨论
    4 小结
第六章 血管瘤病鸡中AIV-J的分离鉴定及其准种分析
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 病毒分离鉴定
        2.2 血清抗体检测
        2.3 ALV-J的准种多样性
        2.4 氨基酸序列同源性比较
        2.5 细胞传代前后准种比较
    3 讨论
    4 小结
第七章 结论
第八章 创新点
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]安徽省地方品种鸡J-亚群禽白血病感染状况的血清学研究[J]. 张丹俊,戴银,赵瑞宏,胡晓苗,潘孝成,夏松林,姚尚祥.  安徽农业科学. 2012(30)
[2]Evolution of quasispecies diversity for porcine reproductive and respiratory syndrome virus under antibody selective pressure[J]. ZHAO Peng, MA ChengTai, DONG Xuan & CUI ZhiZhong College of Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, China.  Science China(Life Sciences). 2012(09)
[3]安徽省鸡J亚群禽白血病血清学调查[J]. 张丹俊,赵瑞宏,胡晓苗,程宝艳,张玉晴,靳宇田,姚尚祥,刘鹏义,戴银,詹凯.  中国家禽. 2011(06)
[4]地方优良鸡种禽白血病病毒感染调查及净化[J]. 张胜斌,吴天威,韦平,吴丹,吴志金,崔治中,吕礼芳,全琛宇,冯世文,玉赵平,王广仁.  中国家禽. 2010(12)
[5]鸡白血病及其鉴别诊断和预防控制[J]. 崔治中.  中国家禽. 2010(08)
[6]Isolation and Identification of a Subgroup A Avian Leukosis Virus from Imported Meat-type Grand-parent Chickens[J]. Qing-chan ZHANG, Dong-min ZHAO, Hui-jun GUO and Zhi-zhong CUI(College of Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China).  Virologica Sinica. 2010(02)
[7]芦花鸡中B亚群禽白血病病毒的分离与鉴定[J]. 赵冬敏,张青婵,崔治中.  病毒学报. 2010(01)
[8]2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查[J]. 高玉龙,邵华斌,罗青平,潘伟,秦立廷,孙芬芬,刘超男,高宏雷,祁小乐,王笑梅.  中国预防兽医学报. 2010(01)
[9]禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较[J]. 王景艳,李中明,赵鹏,陈浩,崔治中.  中国动物传染病学报. 2010(01)
[10]近年来我国禽白血病流行现状及发展趋势分析[J]. 常维山,郭慧君,孙淑红.  中国家禽. 2010(01)

博士论文
[1]J亚群禽白血病病毒分离株变异分析及重组抗原ELISA检测方法的建立[D]. 付朝阳.中国农业科学院 2004

硕士论文
[1]禽白血病病毒p27抗原的单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA检测方法建立[D]. 王绪.扬州大学 2011
[2]禽白血病病毒p27蛋白表达纯化及其单克隆抗体的制备[D]. 杨守锋.西南大学 2009
[3]以重组NP为抗原GPMV抗体间接ELISA检测方法的建立[D]. 刘立峰.东北农业大学 2006
[4]禽白血病抗原检测试剂盒的研究[D]. 曹红.中国农业大学 2005



本文编号：2930525