不同抗虫棉品种BT蛋白表达的研究及转抗除草剂基因GAT/GR79棉花新种质的创制

发布时间：2023-02-15 09:00

　　随着农业生物技术的发展,转基因农作物的生产应用越来越广泛,转基因育种已经发展成为一种主要的育种方式,而在转基因育种过程中,转基因性状的遗传稳定性和表达稳定性一直是育种者特别关注的事情,也是决定转基因农作物安全应用的关键因素。该研究以Southern Blot和ELISA技术为主要试验方法,研究了具有我国自主知识产权的新型抗草甘膦除草剂转基因棉花和抗虫棉花外源功能基因在棉花基因组中的整合情况,以及Bt杀虫基因的代际遗传和Bt杀虫蛋白代际表达的稳定性,并取得了如下结果:1.利用Southern Blot方法,研究了2000-2系谱材料的抗虫基因遗传稳定性。HindⅢ和EcoRⅠ两个限制性内切酶消化基因组后的杂交结果表明,该系谱的所有抗虫材料,均含有单一插入位点的外源抗虫基因表达盒,且该表达盒能随着棉花基因组传递给其后代,保证了转基因性状的遗传稳定性。2.利用ELISA方法,检测了鲁棉系和2000-2系材料的抗虫蛋白表达情况。结果表明Bt基因虽然在不同的材料间的表达上存在差异,但总体而言可以在此两个系谱的抗虫材料的稳定高效表达,体现了转基因性状的表达稳定性。3.利用Southern Blot...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
第1章 绪论
    1.1 抗虫棉的发展历程
        1.1.1 苏云金芽孢杆菌毒素蛋白基因(Bt基因)
        1.1.2 蛋白酶抑制剂基因
        1.1.3 外源凝集素基因
        1.1.4 几丁质酶基因
    1.2 抗除草剂转基因棉花的研究
        1.2.1 抗除草剂转基因棉花的发展历程
        1.2.2 草甘膦性质与作用机理
    1.3 外源基因在转基因植物中的整合、表达的研究分析
    1.4 实验内容、目的及意义
    1.5 技术路线
第2章 抗虫材料Bt基因蛋白表达量的研究
    2.1 材料与方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 不同抗虫棉材料杀虫蛋白表达含量
        2.2.2 棉花基因组的提取
        2.2.3 PCR扩增目的基因
        2.2.4 探针标记的电泳检测
        2.2.5 基因组DNA的酶切
    2.3 讨论
        2.3.1 CTAB法提取棉花基因组
        2.3.2 抗虫棉材料Bt基因蛋白表达量结果
        2.3.3 抗虫棉材料中Bt基因的Southern blot结果
第3章 新型抗除草剂GAT、GR79基因整合位点的分析
    3.1 材料与方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 棉花基因组的提取
        3.2.2 质粒DNA的少量提取
        3.2.3 PCR扩增目的基因
        3.2.4 基因组DNA的酶切检测
        3.2.5 电泳和胶的处理
        3.2.6 转膜与膜的洗涤
        3.2.7 Southern blot结果
    3.3 讨论
第4章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3743213