烟曲霉素在蜂蜜中的残留变化规律研究

发布时间：2017-09-10 22:36

  本文关键词：烟曲霉素在蜂蜜中的残留变化规律研究

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【摘要】：近些年蜜蜂微孢子虫,尤其东方蜜蜂微孢子虫在全世界流行,是蜜蜂爬蜂综合症的主要病因之一,给蜂产业造成了巨大的损失。烟曲霉素被认为是治疗蜜蜂微孢子虫病的高效药,然而由于知识产权、贸易保护等因素,蜂用烟曲霉素在我国还没有授权使用。目前我国蜂农主要依靠甲硝唑防治蜜蜂微孢子虫,导致其在蜂产品残留,给蜂产品质量安全造成了巨大的隐患。课题组已经形成了烟曲霉素的新型生物发酵方法,有望开发烟曲霉素制剂用于蜜蜂微孢子虫病防治。在推广应用之前,有必要开展烟曲霉素在蜂产品生产过程中的残留代谢规律及蜂蜜加工过程中降解规律研究,为烟曲霉素使用量、休药期、最大残留限量的制定和规范烟曲霉素使用方法提供有力的数据支持。本文分为三个部分:一、建立并优化了蜂蜜中烟曲霉素的HPLC-MS/MS分析方法。在前人研究的基础上对蜂蜜中的烟曲霉素的前处理方法和HPLC-MS/MS的分析方法分别进行了优化,确定蜂蜜样品通过Oasis HLB固相萃取小柱净化和提取,使用HPLC-MS/MS测定样品中的烟曲霉素含量。通过方法学验证:该方法的检出限为2μg/kg,在线性范围1-1000μg/L,R2为0.9992,在三个添加水平下,回收率为72.1%-92.1%,批内相对标准偏差为2.7%-10.3%,批间相对标准偏差为5.2%-11.1%。方法简单、快速,方法的检出限、回收率、精密度以及准确度均满足蜂蜜中烟曲霉素残留分析的要求。二、烟曲霉素在巢脾内蜂蜜中的残留代谢规律。对比了不同饲喂浓度和不同处理方式对蜂蜜中烟曲霉素残留的影响。结果表明,烟曲霉素残留量在喂药后第3 d达到峰值,之后呈下降趋势;饲喂后第55 d时,低浓度饲喂组(200 mg/群)蜂蜜中残留量为91±5.2μg/kg(摇蜜处理组为40±4.6μg/kg),高浓度饲喂组(285 mg/群)蜂蜜中残留量为128±6.2μg/kg(摇蜜处理组为43±8.6μg/kg)。蜂蜜中烟曲霉素会在蜂巢内迅速降解和被新采进的蜂蜜的稀释;但在第7 d就摇出所有存蜜的摇蜜组,后续蜂蜜中依然存在较高浓度的烟曲霉素残留,说明蜂群内蜡质巢脾对烟曲霉素具有吸附作用并能反渗透到蜂蜜中。尽管药物饲喂后55d,蜂巢内蜂蜜的药物残留量都显著降低,但均高于欧盟等国10μg/kg的限量要求。因此,养蜂生产中应合理使用烟曲霉素并严格执行休药期,采取定时更换巢脾等措施。三、烟曲霉素在模拟加工条件下的变化规律。探究48 h内光照和温度对蜂蜜中烟曲霉素降解的影响。结果表明,在不同处理组,0-12 h蜂蜜中烟曲霉素含量均快速下降(其中1-3 h降解相对缓慢),12 h-48 h下降速度明显减慢。蜂蜜中烟曲霉素在70℃、有光条件下降解最快,3h-6 h即可下降到10μg/kg以下,18 h后低于检测限(2μg/kg);在60℃、有光条件下经过18 h降解,也可达到10μg/kg以下;而在避光和温度较低时降解缓慢(25℃避光条件下降约50%)。说明烟曲霉素的降解受光照和温度的共同影响,温度越高,降解越快,光照促进烟曲霉素降解。因而即使原料蜜中含有超标的烟曲霉素也可以在后期的蜂蜜融结晶过程中降解,使其符合标准。
【关键词】：烟曲霉素 蜜蜂 微孢子虫 残留降解规律
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O657.63;S896.1
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-13
• 第一章 引言13-24
• 1.1 我国养蜂业兽药使用现状13-14
• 1.1.1 抗生素滥用对蜜蜂和消费者健康的威胁13
• 1.1.2 蜂产品兽药残留对我国蜂产业的影响13-14
• 1.1.3 蜂产品兽药残留超标的原因14
• 1.1.4 甲硝唑超标与蜜蜂微孢子虫病14
• 1.2 蜜蜂微孢子虫病概述14-16
• 1.2.1 蜜蜂微孢子虫病的病原体及发病特征14-15
• 1.2.3 蜜蜂微孢子虫的发现与分布15
• 1.2.4 蜜蜂微孢子虫与CCD15-16
• 1.2.5 蜜蜂微孢子虫与爬蜂病16
• 1.2.6 蜜蜂微孢子虫与蜜蜂越冬及春繁16
• 1.2.7 蜜蜂微孢子虫的防治16
• 1.3 烟曲霉素概述16-21
• 1.3.1 烟曲霉素的发现16-17
• 1.3.2 烟曲霉素的结构与生物活性17-18
• 1.3.3 烟曲霉素作用机理及其应用18-20
• 1.3.4 烟曲霉素稳定性及其残留分析方法20-21
• 1.3.5 各个国家对烟曲霉素授权使用情况21
• 1.4 研究目的及意义21-22
• 1.5 研究内容及技术路线22-24
• 1.5.1 蜂蜜中烟曲霉素检测方法的优化22
• 1.5.2 烟曲霉素在蜂巢内蜂蜜中残留规律研究22
• 1.5.3 烟曲霉素在蜂蜜的加工过程中的降解规律研究22-24
• 第二章 蜂蜜中烟曲霉素残留的分析方法的优化24-32
• 2.1 材料、试剂与仪器24-25
• 2.1.1 主要材料及试剂24
• 2.1.2 标准品24
• 2.1.3 仪器与设备24-25
• 2.2 标准溶液的制备25
• 2.3 色谱条件和质谱条件25
• 2.3.1 色谱条件25
• 2.3.2 质谱条件25
• 2.4 样品处理方法25-26
• 2.5 结果和讨论26-31
• 2.5.1 仪器条件的的优化26-28
• 2.5.2 提取方法的优化28-30
• 2.5.4 方法评价30-31
• 2.6 小结31-32
• 第三章 烟曲霉素在蜂巢内蜂蜜中的残留变化规律研究32-42
• 3.1 材料、试剂与仪器32-33
• 3.1.1 主要材料及试剂32-33
• 3.1.2 标准品33
• 3.1.3 仪器与设备33
• 3.2 试验样品制备33-34
• 3.2.1 试验材料准备33
• 3.2.2 饲喂与取样33-34
• 3.3 标准溶液的制备34
• 3.4 色谱条件与质谱条件34-35
• 3.4.1 色谱条件34-35
• 3.4.2 质谱条件35
• 3.5 样品处理方法35
• 3.6 结果与讨论35-41
• 3.6.1 蜂巢内蜂蜜中烟曲霉素残留量随时间的变化规律35-36
• 3.6.2 不同喂药浓度对烟曲霉素在蜂蜜中残留的影响36-38
• 3.6.3 蜂巢继箱中巢脾位置对其中蜂蜜烟曲霉素残留量的影响38-39
• 3.6.4 巢脾吸附与反渗作用对蜂蜜中烟曲霉素残留的影响39-41
• 3.7 小结41-42
• 第四章 烟曲霉素在蜂蜜加工过程中的降解规律研究42-51
• 4.1 材料、试剂与仪器42-43
• 4.1.1 主要材料及试剂42-43
• 4.1.2 标准品43
• 4.1.3 仪器与设备43
• 4.2 试验样品的制备43-44
• 4.3 标准溶液的制备44
• 4.4 色谱条件和质谱条件44
• 4.4.1 色谱条件44
• 4.4.2 质谱条件44
• 4.5 样品处理方法44
• 4.6 结果与讨论44-50
• 4.6.1 不同温度对蜂蜜中烟曲霉素的降解的影响46-48
• 4.6.2 不同光照条件下烟曲霉素在蜂蜜中的降解规律48-50
• 4.7 小结50-51
• 第五章 结论51-52
• 参考文献52-57
• 致谢57-58
• 作者简历58

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