甲基转移酶METTL3在心肌细胞中的作用研究
发布时间：2021-07-01 11:42
N6-甲基腺苷（m6A）,是一种动态的可逆的RNA转录后修饰。它是由甲基转移酶复合物进行催化安装,可以被RNA去甲基化酶清除,并被含YTH结构域的“读者”蛋白识别并进行转录后调控。METTL3是第一个被鉴定出来的甲基转移酶,做为m6A甲基转移酶复合物的主要催化组成部分,从酵母到人,在真核生物中高度保守。METTL3在细胞增殖、癌症发生、细胞迁移与侵袭、干细胞分化和生存能力等多种生物进程中发挥着重要的作用。目前,METTL3在正常心肌细胞中的作用研究尚无报道。本研究结合NCBI GENE数据库中METTL3在人正常组织中的HPA RNA-seq结果,收集不同时期的小鼠心脏组织进行Western Blot实验,检测METTL3蛋白在不同时期小鼠心脏组织中的表达,结果表明METTL3在人和小鼠心脏组织中有较高表达。我们在已公布的HEK293T细胞的m6A-seq数据中发现Tbx3、Tbx2、Yap1、Nkx2.5、Hand2、Mef2a这六个在心脏组织中发挥着重要作用的基因均呈现出较高的甲基化富集程度。针对上述6个可能被甲基化的基因,在正常及敲降METTL3后的心肌细胞...
【文章来源】：武汉科技大学湖北省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
METTL3在心脏组织中有较高的表达
有研究通过RNA m6A甲基化测序,发现在健康小鼠和人的心脏组织中,大约有四分之一的转录本中均呈现出m6A甲基化状态[64]。在Kate D.Meyer等人的研究中,Me RIP-seq鉴定HEK293T细胞中5,768个基因编码的RNA,其中3,259个基因的转录本均呈现甲基化[7],其中在心脏组织中发挥重要功能的Tbx3、Tbx2、Yap1、Nkx2.5、Hand2、Mef2a基因表现为较高的甲基化富集程度。针对这六个可能被甲基化的基因,我们结合基因RNA的序列对m6A的发生位点进行了一个预测,发现在上述六个基因的序列上均存在着m6A甲基化的发生基序。通过对正常H9C2大鼠心肌细胞进行me RIP-q PCR实验,验证上述六个基因转录本m6A的富集状态。结果如图3.2.1所示,与对照m RNA非m6A甲基化的基因Fibrilarin、Hprt1相比,上述六个基因Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a的m RNA均呈现m6A甲基化状态。METTL3与METTL14等至少五种“Writers”蛋白组成甲基转移酶复合物,负责安装m6A甲基化。在H9C2细胞中使用si RNA瞬时敲降METTL3,检测细胞中Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因的转录本m6A甲基化富集状态的改变。结果如图3.2.2所示,与CTL对照组相比,敲降METTL3使Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因m RNA m6A甲基化富集减少。以上数据表明METTL3调节心肌细胞中基因转录本m6A的水平。
METTL3与METTL14等至少五种“Writers”蛋白组成甲基转移酶复合物,负责安装m6A甲基化。在H9C2细胞中使用si RNA瞬时敲降METTL3,检测细胞中Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因的转录本m6A甲基化富集状态的改变。结果如图3.2.2所示,与CTL对照组相比,敲降METTL3使Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因m RNA m6A甲基化富集减少。以上数据表明METTL3调节心肌细胞中基因转录本m6A的水平。3.3 甲基转移酶METTL3促进心肌细胞的增殖
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA methylation regulates hematopoietic stem and progenitor cell development[J]. Jason Ear,Shuo Lin. Journal of Genetics and Genomics. 2017(10)
[2]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文编号：3259071
【文章来源】：武汉科技大学湖北省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
METTL3在心脏组织中有较高的表达
有研究通过RNA m6A甲基化测序,发现在健康小鼠和人的心脏组织中,大约有四分之一的转录本中均呈现出m6A甲基化状态[64]。在Kate D.Meyer等人的研究中,Me RIP-seq鉴定HEK293T细胞中5,768个基因编码的RNA,其中3,259个基因的转录本均呈现甲基化[7],其中在心脏组织中发挥重要功能的Tbx3、Tbx2、Yap1、Nkx2.5、Hand2、Mef2a基因表现为较高的甲基化富集程度。针对这六个可能被甲基化的基因,我们结合基因RNA的序列对m6A的发生位点进行了一个预测,发现在上述六个基因的序列上均存在着m6A甲基化的发生基序。通过对正常H9C2大鼠心肌细胞进行me RIP-q PCR实验,验证上述六个基因转录本m6A的富集状态。结果如图3.2.1所示,与对照m RNA非m6A甲基化的基因Fibrilarin、Hprt1相比,上述六个基因Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a的m RNA均呈现m6A甲基化状态。METTL3与METTL14等至少五种“Writers”蛋白组成甲基转移酶复合物,负责安装m6A甲基化。在H9C2细胞中使用si RNA瞬时敲降METTL3,检测细胞中Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因的转录本m6A甲基化富集状态的改变。结果如图3.2.2所示,与CTL对照组相比,敲降METTL3使Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因m RNA m6A甲基化富集减少。以上数据表明METTL3调节心肌细胞中基因转录本m6A的水平。
METTL3与METTL14等至少五种“Writers”蛋白组成甲基转移酶复合物,负责安装m6A甲基化。在H9C2细胞中使用si RNA瞬时敲降METTL3,检测细胞中Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因的转录本m6A甲基化富集状态的改变。结果如图3.2.2所示,与CTL对照组相比,敲降METTL3使Yap1、Hand2、Tbx2、Nkx2.5、Tbx3、Mef2a六种基因m RNA m6A甲基化富集减少。以上数据表明METTL3调节心肌细胞中基因转录本m6A的水平。3.3 甲基转移酶METTL3促进心肌细胞的增殖
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA methylation regulates hematopoietic stem and progenitor cell development[J]. Jason Ear,Shuo Lin. Journal of Genetics and Genomics. 2017(10)
[2]N6 -methyl-adenosine （m6 A） in RNA: An Old Modification with A Novel Epigenetic Function[J]. Yamei Niu,Xu Zhao,Yong-Sheng Wu,Ming-Ming Li,Xiu-Jie Wang,Yun-Gui Yang. Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2013(01)
本文编号：3259071
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