非伤寒沙门氏菌临床株毒力基因初步分析

发布时间：2019-01-02 12:54

【摘要】：目的:采用PCR扩增和DNA序列分析技术,检测急性腹泻患者分离的非伤寒沙门氏菌(NTS)毒力基因携带情况与特点,探讨感染人体的NTS菌株血清型、分子分型、耐药表型与毒力基因携带的关系,为预防与控制NTS感染提供依据。方法:1、毒力基因检测:实验菌株为2012年~2013年分离自天津医科大学第二医院肠道门诊急性腹泻患者粪便标本的45株NTS,包括12个血清型、23个PFGE型和13个MLST型;以毒力岛SPI1~5基因sitC、hilA、sseL、sifA、mgtC、siiE、sopB毒性质粒基因prot6E、pefA、spvB和DNA毒素基因cdtB和调控基因phoP为目的基因,进行PCR扩增,并对cdtB阳性的菌株cdtB、pltA、pltB基因的全长进行扩增。2、PCR产物序列分析:从每个目的基因的PCR扩增阳性产物中随机挑选1株进行测序分析;对cdtB及其相关基因pltA和pltB进行全长扩增测序,用BLAST和ClustalX分析其DNA序列以及推导出的氨基酸序列与GenBank中代表性菌株序列的相似性。3、毒力基因携带与抗菌药物敏感性统计分析:使用SPSS 20.0软件进行统计学分析。毒力基因携带与对抗菌药物的敏感性用Fisher精确计算进行统计,P0.05视为有统计学差异。结果:1、45株NTS毒力基因检出率依次为:sitC、hilA、mgtC、siiE、sopB、phoP100%,sseL、sifA97.78%,prot6E 31.11%,pefA、spvB 37.78%,cdt B 2.22%。与GenBank中对应的参考序列相似性分别是sitC 98%、hil A 98%、siiE 99%、spvB 100%、prot6e100%、sifa99%、mgtc100%、sopb99%、ssel100%、pefa99%、phop100%、cdtb99%。2、毒力岛基因:45株nts全部检测到了sitc、hila、mgtc、siie、sopb;除了菌株406,其余44株都检测到sifa基因;除了菌株25,其余44株都检测到ssel基因。3、毒性质粒基因:全部14株肠炎血清型沙门氏菌,无论pt型如何,都检测到了位于质粒上的毒力基因prot6e、spvb、pefa;全部9株鼠伤寒血清型沙门氏菌中,3株st19型检测到spvb和pefa,prot6e则阴性,它们的pt型分别为pt04和pt20,而另外6株st34型都没有得到以上3种基因阳性扩增产物;其他血清型菌株也均未得到这3种基因阳性扩增产物。4、cdtb基因:有1株格兰扁血清型沙门氏菌检测到了cdtb基因,测序结果显示cdtb长819bp,其相关基因plta长729bp,pltb长414bp;各编码269aa、243aa、140aa长的多肽链。序列比对结果显示cdtb与genbank中的沙门氏菌的相似性在93.1%~99.5%,氨基酸序列相似性为92.6%~99.3%;plta与genbank中的沙门氏菌的同源性在81.5%~99.6%,氨基酸序列相似性为78.2%~100.0%;pltb与genbank中的沙门氏菌的同源性在64.3%~99.0%,氨基酸序列相似性为69.1%~100.0%。5、毒力基因与抗菌药物敏感性的关系:萘啶酸的敏感性与prot6e、spvb、pefa相关,p值均0.001;四环素的敏感性与prot6e、spvb、pefa相关,p值分别是0.044、0.017、0.017;链霉素的敏感性与prot6e相关,p值为0.046。其他抗菌药物敏感性与本次检测的毒力基因未见统计学相关性。结论:1、所有实验菌株中都含有毒力岛spi1~5代表性基因,spi1~5可能是非伤寒沙门氏菌感染人体所必需。2、毒性质粒基因prot6e可能是肠炎血清型沙门氏菌的特有基因。鼠伤寒沙门氏菌携带毒性质粒基因可能与mlst分型有关,应高度警惕本地区mlst19型鼠伤寒沙门氏菌进化为耐药性更强、致病力更高的菌株。3、首次在格兰扁血清型中发现了cdtB、pltA、pltB基因,其DNA序列和推导出的氨基酸序列与其他血清型NTS存在差异,对格兰扁沙门氏菌致病性的影响值得进一步研究。4,本地区NTS菌株携带毒力基因与耐药表型有关,可能存在二者位于同一遗传元件共同播散的机制。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R440

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