ace、cntf、actn3多态位点作为黑龙江省雪上项目运动员分子选材标记可行性研究

发布时间：2020-08-07 17:59

【摘要】：研究目的:为探寻黑龙江省雪上项目运动员基因选材分子标记,本论文对我国单板坡面障碍、单板U型场地技巧、单板平行大回转、单板追逐、北欧两项和越野滑雪项目运动员ace基因I/D多态性、cntf基因A/G多态性和actn3基因R/X多态性的分布情况进行统计,根据实验结果分析以上基因多态性与黑龙江省雪上项目运动员的专项运动能力是否存在关联,从而判断能否将以上基因作为黑龙江省部分雪上项目运动员早期选材分子标记,为我国雪上项目运动员科学选材体系提供参考,同时为同类项群基因选材体系的完善提供更多基础数据。研究方法:本研究依据雪上项目特点,将所选取的68名黑龙江省部分雪上项目优秀运动员分成两大类:雪上技巧型及雪上耐力型项目运动员;同时随机抽取158名普通大学生作为对照组。采用聚合酶链式反应法对受试者的ace基因I/D多态性进行检测,运用限制性片段长度多态技术对受试者的cntf基因A/G多态性和actn3基因R/X多态性进行检测,得出不同组别此三种基因多态性频率分布及等位基因频率。对实验结果进行遗传学平衡定律检验,判断所选取人群是否具有群体代表性。将实验数据进行统计学分析,根据卡方检验结果判断以上基因与所选取项目杰出运动能力是否存在关联,最终对以此三种基因作为黑龙江省部分雪上项目选材用分子标记的可行性进行分析。研究结果:1、本研究中各组ace基因I/D多态性、cntf基因A/G多态性、actn3基因R/X多态性分布均符合Hardy-Weinberg遗传定律(P0.05),具有群体代表性,可用作群体样本进行研究。2、各实验组ace基因I/D多态性基因型及等位基因频率分布在组间及与对照组的统计学对比中均无显著性差异(P0.05)。但实验结果显示耐力型项目组II基因型频率分布(40.91%)高于技巧型项目组(32.61%)和对照组(29.11%)。3、cntf基因A/G多态性在技巧型雪上项目组与对照组间、在单板坡面障碍与越野滑雪运动员间基因型频率分布呈现显著性差异(P0.05),等位基因频率分布呈现极其显著性差异(P0.01)。在单板坡面障碍与单板追逐运动员间呈现显著性差异(P0.05);在单板坡面障碍与对照组间呈现极其显著性差异(P0.01)。技巧项目组GG基因型频率及G等位基因频率(63.05%;75.00%)显著高于耐力项目组(40.91%;59.09%)及对照组(38.61%;59.49%)。4、各实验组actn3基因R/X多态性基因型及等位基因频率分布在组间及与对照组的统计学对比中均无显著性差异(P0.05),且分布极为相似。研究结论:1、不建议将ace基因I/D多态位点作为黑龙江省雪上项目基因选材分子标记参考指标,但不排除该基因II基因型与I等位基因与雪上耐力型项目相关的可能,应在后续研究中加大样本量验证。2、cntf基因A/G多态位点有作为黑龙江省部分技巧型雪上项目,特别是单板坡面障碍项目运动员基因选材分子标记的可能,该基因GG基因型及G等位基因与杰出爆发力素质相关。3、不建议将actn3基因R/X多态位点作为黑龙江省雪上项目基因选材分子标记参考指标,但不排除该结果有实验样本量不足的影响,应在后续研究中加大样本量,补充实验数据。
【学位授予单位】：哈尔滨体育学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：G863
【图文】：

4.1.1 ace 基因 I/D 多态性判断ace 基因位于第 17 号染色体长臂 2 区 3 带第 3 亚带（17q23.3），全长为共有 26 个外显子、25 个内含子和两个启动子，其中外显子 7 和外显子 20 有的同源性，外显子 8 和外显子 21 有 68%的同源性，该信息提示 ace 基因有的可能[64]。同时 ace 基因具有高度多态性，目前已发现的多态标记就多达在这些多态标记中，针对第 16 内含子存在的 287bpAlu 插入/缺失（I/D）片究的最多。由于 Alu 的插入或缺失，当目标片段经 PCR 扩增后再经琼脂糖凝胶电测，即可出现两种不同长度的片段：490bp 的插入（I）片段和 190bp 的缺失片段；在紫外灯下可呈现出三种带型：单一 490bp 条带的 II 插入型、单一条带的 DD 缺失型和有两个条带 490bp+190bp 的 ID 杂合型[33]。因此，ac在此多态位点可分为 DD、ID 和 II 三种不同的基因型。本研究部分 ace 基因多态性检测结果如下（图 4）：

ace、cntf、actn3 多态位点作为黑龙江省雪上项目运动员分子选材标记可行性研究94bp 和 40bp，定义为 G；而不含酶切位点的 134bp 片段即是 A 等位基因。该酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下即可呈现出三种带型：单一 134bp 条带的 AA 纯合型、94bp+40bp 两条条带的 GG 纯合型、134bp+94bp+40bp 三条条带的 AG 杂合型。因此，cntf 基因在此多态位点可分为 AA、AG 和 GG 三种不同的基因型。本研究部分 cntf 基因多态性检测结果如下（图 5）：

核苷酸有从 C 突变为 T 位点的可能。如果无突变发生，则为 RR 纯合子；若点发生突变，则为 XX 突变纯合型；若既有 C 又有 T 则为 RX 杂合型。在目标 DNA 中，加入根据 actn3 基因特点及实验目的所设计的引物后PCR 扩增，出现长度为 291bp 的 DNA 片段。如果为 RR 型，扩增出来的片有一个 Dde I 酶切位点；若带有 1747C 到 T 突变，则会产生一个新的酶切actn3 基因 PCR 扩增片段经 Dde I 限制性内切酶切割后，存在一个酶切位点被酶切反应切割为 205bp 和 86bp 两种片段；存在两个酶切位点的可被酶切切割为 108bp、97bp 和 86bp 三种片段。于是该酶切产物经琼脂糖凝胶电泳在紫外灯下即可呈现出三种带型：205bp+86bp 两条条带的 RR 纯合108bp+97bp+86bp 三条条带的 XX 纯合型、205bp+108bp+97bp+86bp 四条条RX 杂合型。因此，actn3 基因在此多态位点可分为 RR、XX 和 RX 三种不基因型。本研究部分 actn3 基因多态性检测结果如下（图 6）：

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本文编号：2784329