CETP基因rs708272与运动调节血脂效果的关联性研究

发布时间：2017-07-29 21:10

  本文关键词：CETP基因rs708272与运动调节血脂效果的关联性研究

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【摘要】：目的：探讨CETP基因rs708272多态位点与运动调节肥胖青少年血脂效果的关联性,并通过双荧光素酶报告系统研究其分子调控机理,阐明不同等位基因在表达调控上的作用。对象和方法：(1)对象：50名中国北方肥胖青少年,平均年龄14.9±3.35岁。其中,男生23人,女生27人,均知情同意；(2)方法：受试者进行为期一个月的运动减脂实验,以有氧运动为主,辅以力量和拉伸训练,统一饮食。于实验前后取空腹肘静脉血测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C等4个指标,用PCR-RFLP法对CETP基因rs708272位点进行分型,观察rs708272位点与肥胖青少年运动降血脂效果的关联性；以CETP基因rs708272位点为B1B1型纯合子的基因组DNA为模板,通过PCR获得野生型和突变型两个片段,分别插入到pGL3-Promoter中构建重组质粒,转染293T细胞后检测重组质粒中荧光素酶报告基因的相对表达活性。结果：(1)50名肥胖青少年的CETP基因rs708272位点分布特征是：B1B1基因型频率为0.26,B1B2基因型频率为0.56,B2B2基因型频率为0.18,符合H-W平衡,具有群体代表性；(2)经过一个月的运动减脂,B1B2基因型组血清△TC(0.64±0.51 mmol/L)、△LDL-C(0.51±0.41 mmol/L)显著大于B1B1基因型组(△TC: 0.20±0.53 mmol/L; △LDL-C:0.24±0.35 mmol/L); B2B2基因型组(-0.10±0.15 mmol/L)和B1B1基因型组(-0.18±0.26 mmol/L)血清△HDL-C显著小于B1B2基因型组(0.03±0.16mmol/L);(3)两个重组载体中报告基因的活性显著高于对照组载体pGL3-Promoter (3.78±0.11),并且CETP基因rs708272位点为B2等位基因的重组载体中报告基因相对活性(31.19±1.50)显著高于B1等位基因(11.40±0.26)。结论：(1)CETP基因rs708272位点为B2等位基因的肥胖青少年对本研究制定的运动计划更加敏感；(2) CETP基因第一内含子对基因表达具有正向调控作用,并且rs708272位点处由B1→B2的突变是功能性突变,能显著提高CETP基因的表达活性。
【关键词】：CETP 基因多态性 血脂 运动减脂 分子机制
【学位授予单位】：北京体育大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：G804.7
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 前言10-11
• 1 文献综述 胆固醇酯转运蛋白基因rs708272多态性的研究进展11-23
• 1.1 内含子的定义及位置11-12
• 1.2 内含子的分类12-13
• 1.3 内含子在基因表达调控中的作用13-14
• 1.3.1 内含子对基因表达的正调控作用13-14
• 1.3.2 内含子对基因表达的负调控作用14
• 1.4 内含子多态性的研究现状14-15
• 1.5 CETP基因的结构和功能15-18
• 1.6 CETP基因多态位点18-20
• 1.7 CETP基因rs708272多态性研究现状20-22
• 1.8 小结22-23
• 2 研究对象与方法23-42
• 2.1 研究对象23
• 2.2 训练计划23
• 2.3 测试指标23
• 2.4 主要试剂23-24
• 2.5 主要试剂配制24-25
• 2.6 菌株和细胞株25
• 2.7 主要仪器25-26
• 2.8 基因提取及分型26-28
• 2.8.1 基因组提取26-27
• 2.8.2 胆固醇酯转运蛋白rs708272位点多态性分析27-28
• 2.9 胆固醇酯转运蛋白rs708272位点的功能分析28-42
• 2.9.1 CETP基因第一内含子序列扩增28-30
• 2.9.2 CETP基因rs708272位点突变30-33
• 2.9.3 双酶切33-34
• 2.9.4 目的片段与表达载体连接34
• 2.9.5 连接产物的转化34-35
• 2.9.6 重组质粒的提取与鉴定35-36
• 2.9.7 细胞培养36-37
• 2.9.8 细胞转染37-41
• 2.9.9 双荧光素酶报告基因表达检测41-42
• 2.10 统计学分析42
• 3 结果42-56
• 3.1 CETP基因rs708272多态性与减脂训练效果的关联性42-48
• 3.1.1 CETP基因rs708272位点PCR扩增结果42-43
• 3.1.2 CETP基因rs708272位点分型结果43-44
• 3.1.3 CETP基因rs708272多态性分布特征44
• 3.1.4 CETP基因rs708272多态性与TC、TG、LDL-C、HDL-C的关联性44-48
• 3.2 CETP基因rs708272位点的功能研究结果48-56
• 3.2.1 CETP基因第一内含子的扩增结果48-49
• 3.2.2 CETP基因rs708272位点突变结果49-51
• 3.2.3 双酶切结果51-52
• 3.2.4 重组质粒的鉴定52-53
• 3.2.5 细胞转染53-55
• 3.2.6 双荧光素酶报告基因表达活性检测55-56
• 4 分析与讨论56-61
• 4.1 CETP基因rs708272多态性的分布特征56-57
• 4.2 CETP基因rs708272多态性与运动减脂训练敏感性的关联分析57-59
• 4.3 内含子的调控功能59-60
• 4.4 不同等位基因调控功能的差异60-61
• 5 结论61-62
• 致谢62-63
• 参考文献63-72
• 附录72-77
• 1 中英文对照表72-73
• 2 训练计划73-74
• 3 食谱74-75
• 4 知情同意书75-77
• 个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果77

【参考文献】

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本文编号：591098