基于NADPH氧化酶途径的运动性蛋白尿机制研究

发布时间：2017-08-09 22:15

  本文关键词：基于NADPH氧化酶途径的运动性蛋白尿机制研究

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【摘要】：研究目的：运动氧应激是运动性蛋白尿产生的重要原因,但运动导致的肾脏活性氧的来源及其作用机制尚不清楚。以大鼠力竭性跑台运动为模型,并为大鼠尾部注射NADPH氧化酶抑制剂apocynin,研究运动性蛋白尿产生的机制。并根据力竭运动后大鼠肾组织形态和足细胞裂孔蛋白nephrin的变化,进一步探索蛋白尿形成的机制。研究方法：实验一：32只SD雄性大鼠随机分为安静对照组(C组)、对照+药物组(CA组)、力竭运动组(E组)、力竭运动+药物组(EA组),每组8只。药物注射按10mg/kg体重,每天一次,连续三天,并在EA组末次药物注射一小时后进行一次性力竭运动。测定运动后尿UP、血液BUN水平、肾脏ROS浓度、NOS活性、NOS与3-NT蛋白表达。实验二：14只SD雄性大鼠随机分为安静对照组(C组)、力竭运动组(E组),每组七只。连续三天力竭性运动,以20m/min开始,坡度5%,5min；逐渐增加至24m/min,坡度10%,直到力竭。测定运动后尿UP、尿液尿酸、尿液葡萄糖、血液尿酸、血液葡糖糖、血BUN、肾脏ROS浓度、肾脏iNOS、3-NT、NOX4和nephrin蛋白表达、肾组织形态变化。研究结果：实验一：(1)一次性力竭运动后,E组大鼠尿蛋白含量较C组相比有显著性升高(P0.01),EA组与E组相比下降明显(P0.05),E组、EA组血液BUN也显著升高。(2)一次性力竭运动后,E组肾组织ROS生成量与C组相比明显升高(P0.05),EA组较E组ROS生成量亦显著性降低(P0.05)。(3)E组和EA组肾iNOS活性较C组明显增高(P0.05),而nNOS和eNOS的活性未见变化。同时,也仅见E组和EA组肾iNOS蛋白表达明显增加(P0.05),而nNOS和eNOS未见变化。(4)E组较C组肾3-NT生成量显著增高(P0.01),而EA组与E组相比明显降低(P0.05)。实验二：(1)力竭运动后,E组大鼠尿液较C组相比尿蛋白(P0.01)、尿酸(P0.01)、尿糖(P0.05)含量明显增高。(2)力竭运动后,E组大鼠血清尿酸、血BUN水平明显升高(P0.01)、血糖(P0.01)含量显著性降低。(3)力竭运动后,E组大鼠肾脏ROS较C组相比明显身高(P0.01)。(4)力竭运动后,E组大鼠肾组织iNOS、3-NT含量明显升高(P0.01),nephrin蛋白表达明显降低(P0.05)(5)肾组织苏木精染色发现,C组大鼠肾小球形态正常均匀,排列规则,E组大鼠可见肾小球球体肥大,肾小球形态改变且分布减少,毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生。研究结论：(1)力竭运动可明显增加大鼠尿蛋白、BUN、尿酸及尿液尿糖水平,同时降低血糖含量。(2)力竭运动可明显增加大鼠肾组织NADPH氧化酶活性,并产生大量O2-,通过注射apocynin可明显抑制该酶活性。(3)力竭运动可明显增加肾组织iNOS活性和蛋白表达。(4)力竭运动后,肾组织3-NT表达明显增高,推测是力竭运动所致NADPH氧化酶途径的02.产生增加,大量的02-.与NO反应生成ONOO-(5)力竭运动可诱导肾组织足细胞裂孔蛋白nephrin蛋白表达减少,提示力竭运动可改变大鼠肾组织滤过结构。(6)显微镜观察到力竭运动后大鼠肾组织细胞结构受损,滤过屏障受破坏,进而我们推测力竭运动可通过增加大鼠肾组织ONOO浓度,诱导足细胞裂孔蛋白nephrin表达降低,导致肾滤过功能结构改变,从而引发运动性蛋白尿的发生。
【关键词】：NADPH氧化酶 运动性蛋白尿 活性氧 过氧亚硝基阴离子 一氧化氮 足细胞 nephrin
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：G804.2
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 缩略词14-15
• 第1章 绪论15-25
• 1.1 运动性蛋白尿概述15-17
• 1.1.1 运动性蛋白尿简介15
• 1.1.2 运动性蛋白尿在运动训练中的研究进展15-16
• 1.1.3 运动性蛋白尿的形成机制16-17
• 1.2 力竭运动对肾组织损伤的研究进展17-19
• 1.2.1 力竭运动与肾组织结构损伤18
• 1.2.2 力竭运动与肾组织功能损伤18-19
• 1.2.3 力竭运动与肾组织细胞凋亡19
• 1.3 NADPH氧化酶的研究进展19-22
• 1.3.1 NADPH氧化酶的分子构成19-20
• 1.3.2 NADPH氧化酶的活性及其抑制剂apocynin的研究进展20-21
• 1.3.3 运动诱导肾组织NADPH氧化酶途径的ONOO-的研究进展21-22
• 1.4 肾组织结构损伤的研究进展22-24
• 1.4.1 肾裂孔膜损伤的病理性研究进展23
• 1.4.2 运动诱导的肾裂孔膜损伤的研究进展23-24
• 1.5 本文构想24-25
• 第2章 NADPH氧化酶途径的运动性蛋白尿的研究25-39
• 2.1 引言25
• 2.2 材料与方法25-30
• 2.2.1 实验动物25
• 2.2.2 运动分组、运动方案、药物方案25-26
• 2.2.3 样本的采集与处理26-27
• 2.2.4 指标测定27-30
• 2.2.5 主要实验仪器30
• 2.2.6 数据分析30
• 2.3 NADPH氧化酶途径的大鼠蛋白尿实验结果30-34
• 2.3.1 运动负荷相关指标30-32
• 2.3.2 肾组织ROS变化32
• 2.3.3 肾组织NOS的变化32-33
• 2.3.4 肾ONOO-的变化33-34
• 2.4 NADPH氧化酶途径的运动性蛋白尿生成机制的讨论34-38
• 2.4.1 一次性力竭运动对大鼠UP及BUN的影响34-35
• 2.4.2 肾组织ROS的变化35-36
• 2.4.3 肾组织ONOO~-的变化36-38
• 2.5 本章小结38-39
• 第3章 力竭运动对大鼠肾脏裂孔膜蛋白nephrin的影响39-54
• 3.1 引言39-40
• 3.2 材料与方法40-44
• 3.2.1 实验动物40
• 3.2.2 运动分组、运动方案40
• 3.2.3 样本的采集与处理40-41
• 3.2.4 指标测定41-43
• 3.2.5 主要实验仪器43-44
• 3.2.6 数据分析44
• 3.3 力竭运动对大鼠肾脏裂孔膜蛋白nephrin影响的结果分析44-49
• 3.3.1 运动负荷相关指标44-46
• 3.3.2 肾组织ROS、NOX4变化46-47
• 3.3.3 肾组织iNOS蛋白含量47
• 3.3.4 肾组织3-NT蛋白表达47-48
• 3.3.5 肾组织nephrin蛋白表达48
• 3.3.6 各组大鼠肾组织冷冻切片48-49
• 3.4 力竭运动对大鼠肾脏裂孔膜蛋白nephrin影响的讨论49-53
• 3.4.1 力竭运动对大鼠血、尿生化指标的影响49-50
• 3.4.2 肾组织ROS含量及NOX4蛋白表达的变化50-51
• 3.4.3 肾组织iNOS蛋白表达的变化51
• 3.4.4 肾组织3-NT蛋白表达的变化51-52
• 3.4.5 肾组织nephrin蛋白表达的变化52-53
• 3.4.6 肾组织形态变化53
• 3.5 本章小结53-54
• 结论54-55
• 参考文献55-62
• 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录62-63
• 致谢63

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本文编号：647567