鹿衔草中总黄酮和总多酚提取工艺研究

　　本文来自《中国生物工程杂志》的技术论文，主要是关于不同难度阅读理解测试学生元认知策略运用状况的相关研究，详情请看下面的介绍。

　　鹿衔草为鹿蹄草科植物鹿蹄草(PyrolacallithaH．Andres)或普通鹿蹄草(PyroladecorateH．Andres)的干燥全草，鹿衔草具有增加机体免疫力、扩张血管、促进冠脉循环、降压、调脂等作用，对于治疗心脑血管疾病疗效确切，有很好的开发利用前景。目前已经分离鉴定出金丝桃苷、高熊果酚苷、鹿蹄草素、肾叶鹿蹄草苷、羟基肾叶鹿蹄草苷、没食子酰基高熊果酚苷、2一O一没食子酰基金丝桃苷、没食子酸、儿茶素等多种黄酮和多酚类成分，现代药理学研究表明，这些黄酮和多酚类化合物是治疗心脑血管疾病的主要有效成分。因此，本试验以总黄酮和总多酚含量为考察指标，采用正交试验优选最佳提取工艺，为鹿衔草的开发利用和生产实际提供理论依据。

　　1仪器与试药

　　1．1仪器752型紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；760CRT双光束紫外一可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)；BP一121S电子天平(天津仪器厂)；RE-52AA型旋转蒸发仪(上海亚荣仪器厂)。

　　1．2试药鹿衔草：购自山西万荣县，经山西医科大学药学院生药教研室白云娥副教授鉴定为鹿蹄草科植物普通鹿蹄草(PyroladecorateH．Andres)的干燥全草；芦丁对照品(中国药品生物制品鉴定所，10081—9906)；没食子酸对照品(中国药品生物制品鉴定所，0831-9501)；三氯化铝、醋酸钾、醋酸钠、醋酸、碳酸钠、钨酸钠、磷酸等试剂均为分析纯。

　　2方法与结果

　　2．1总黄酮的含量测定

　　2．1．1溶液的制备：(1)对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的芦丁标准品11．0mg，置于25mI量瓶中，加50乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每mI含芦丁440g)。(2)供试品溶液制备：精密称取药材提取物50mg，精密称定，置25mI量瓶中，加50乙醇适量，超声30rain，放冷用50乙醇适量稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

　　2．1．2测定波长的选择：分别精密量取芦丁对照品溶液、供试品溶液适量，置于10mI量瓶中，加0．1mol／l的醋酸钾溶液3ml，0．1mol／l的三氯化铝溶液2mI，显色20min，加5O乙醇稀释至刻度。以50的乙醇为参比，按照紫外分光光度法在300～600nm波长范围内扫描，对照品和供试品在410nm均有最大吸收，故确定410nm为测定波长。

　　2．1．3线性关系考察：精密量取对照品溶液0．1ml。0．2ml。0．3ml，0．4ml，0．5mI，0．6mI，置于10mI量瓶中，加0．1mot／l的醋酸钾溶液3mI，0．1mol／I的三氯化铝2mI，显色20rain，加5O乙醇稀释至刻度，摇匀，同时作空白。照分光光度法在410nm的波长处测定吸收度，以吸收度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：A一0．0331C+0．0305(r=0．9999)，结果表明，芦丁在4．4～26．4／zg／mI范围内，线性良好。

　　2．1．4样品含量测定：取供试品溶液1mI，置于10mI量瓶中，按2．1．3项下显色方法显色2Omin，加5O乙醇稀释至刻度，摇匀，测定A，按标准曲线计算总黄酮含量，总黄酮以芦丁。

　　2．2总多酚的含量测定

　　2．2．1溶液的制备：(1)Folin试液的配制：称取10g钨酸钠置于圆底烧瓶中，用75mI的蒸馏水溶解，加入85磷酸8mI，回流3h，冷却移入100mI量瓶中用蒸馏水定容。(2)对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品10．8mg，置于100mI棕色量瓶中，加入30甲醇稀释至刻度，笔耕论文新浪博客，摇匀，即得(每mI含没食子酸108g)。(3)供试品溶液制备：精密称取药材提取物0．3g，精密称定，置25mI量瓶中，加5O乙醇适量，超声30rain，放冷用5O9／6乙醇适量稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

　　2．2．2测定波长的选择：精密量取没食子酸对照品溶液、供试品溶液适量，分别置于10mI量瓶中，用0．1mol／I醋酸钠一醋酸缓冲液定容，摇匀，分别取1mL于10mI量瓶中，加Folin试液0．5mL，用2碳酸钠溶液定容，放置30rain显色。按照紫外分光光度法在400～900nm波长范围内扫描，结果显示，显色后对照品和供试品在730nm均有最大吸收，故选择730nm为测定波长。

　　2．2．3线性关系考察：分别吸取对照品溶液1．0ml，2．0ml，3．0mI，4．0mI，5．0mI，6．0ml，置于10mI量瓶中，用0．1mol／l醋酸钠一醋酸缓冲液定容，摇匀，分别取1mI于10mI量瓶中，按2．2．2方法显色后放置30rain，避光保存，在730nm处测定吸光度，以吸收度(A)为纵坐标，没食子酸浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：A一0．1503C+0．0l11(r一0．9999)，结果表明，没食子酸在1．08～6．48~g／mI范围内，线性关系良好。

　　2．2．4样品含量测定：取供试品溶液1mI，置于10mI量瓶中，用0．1mol／I醋酸钠一醋酸缓冲液定容，摇匀，取1mI于10mI量瓶中，按2．2．2项下显色后避光放置30rain，测定A，按标准曲线计算总多酚含量，总多酚以没食子酸计。

　　2．3鹿衔草提取方法考察称取5g过2O目筛的鹿衔草干燥粗粉五份，精密称定分别按下列方法提取。

　　乙醇回流提取法：加入50乙醇100mI，回流提取2h，提取液过滤，将滤液减压浓缩，真空干燥制成干燥浸膏，精密称定干膏重量，备用。水回流提取法：加入水100mI，回流提取2h，提取液过滤，将滤液减压浓缩，真空干燥制成干燥浸膏，精密称定干膏重量，备用。

　　渗漉提取法：50mI50乙醇装筒浸渍48h，加100mI5O乙醇，以2mI／rain速度渗漉，收集渗漉液，减压浓缩，真空干燥制成干燥浸膏，精密称定干膏重量，备用。索氏提取法：加100mI50乙醇，索氏提取2h，提取2次，合并提取液，减压浓缩，真空干燥制成干燥浸膏，精密称定干膏重量，备用。

　　乙醇超声提取法：加入50乙醇100mL，超声提取30min，提取液过滤，将滤液减压浓缩，真空干燥制成干燥浸膏，精密称定干膏重量，作为提取物备用。将上述5种方法所得的提取物制备供试品溶液，采用分光光度法测定提取物中总黄酮和总多酚的含量，并计算5种提取方法的提取率及浸膏中的含量，结果见表1。结果表明采用乙醇回流提取法，两类有效成分的提取率及浸膏中含量均较高，故确定选用乙醇回流提取法为最佳提取方法。

　　2．4正交试验设计在预实验基础上，确定采用乙醇回流提取，对乙醇浓度、提取时间、提取次数和料液比4个因素，以鹿衔草总黄酮、总多酚提取率为考察指标进行L。(3)正交实验。