石油乳化液对海胆基因突变和甲基化的影响

发布时间：2020-12-19 02:08

　　近海石油开采和石油泄漏事故导致大量的石油烃排放至海洋环境中,对海洋生态系统产生了长期和短期的损害,综合评估海洋石油污染的生物毒性效应是十分必要的。由于石油烃的水溶组分是潜在的毒性成分,本文通过室内模拟石油烃污染暴露试验测定船用120#燃料油分散液和乳化液对模式生物海胆的慢性毒性效应,从分子水平研究石油烃对生物体的毒性机制,为海上石油烃污染风险评估提供依据。首先运用高效液相色谱技术检测不同暴露天数、不同浓度石油烃暴露下海胆全基因组DNA甲基化水平,结果表明：随着污染暴露时间的增长,分散液试验组和乳化液试验组均导致DNA过低甲基化现象,而且乳化液试验组导致更低水平的DNA甲基化。其次运用单链构象多态性分子标记技术（PCR-SSCP）和DNA基因测序技术研究120#燃料油分散液和乳化液污染暴露后对控制海胆肠道发育的SP-Lox基因和参与海胆细胞分化增殖的SP-Runt基因的影响,结果表明SP-Lox基因未出现基因突变,SP-Runt基因在乳化液试验组暴露21天后出现基因突变,基因测序后显示其编码区第986位碱基T突变成碱基C,氨基酸由缬氨酸变成丙氨酸。最后对比120#燃料油分散液和乳化液对马... 

【文章来源】：大连海事大学辽宁省 211工程院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 石油污染海洋现状
        1.1.2 石油污染海洋中迁移转化
        1.1.3 石油污染对海洋生态环境的影响
    1.2 研究现状
        1.2.1 海洋石油污染的毒理学研究进展
        1.2.2 化学分散剂的应用及影响
        1.2.3 消油剂的毒性效应研究进展
        1.2.4 海洋生物DNA甲基化水平检测方法研究
        1.2.5 海洋生物基因突变检测方法研究
    1.3 研究目的、内容、意义、技术路线
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究内容
        1.3.3 研究意义
        1.3.4 技术路线
第2章 试验材料、试验油品、试验方案的设置
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验油品的选择
        2.1.2 试验所用消油剂的选择
        2.1.3 试验受试生物的选择
    2.2 试验仪器及药品
        2.2.1 试验仪器
        2.2.2 试验药品
    2.3 试验油品的制备
        2.3.1 试验油品浓度的测定
        2.3.2 消油剂的投放比例与油品浓度的关系
        2.3.3 试验油品方案的确定
    2.4 试验方案
        2.4.1 受试生物的培养
        2.4.2 污染暴露慢性毒性试验
        2.4.3 海胆DNA的提取步骤
第3章 消油剂处理石油烃对海胆DNA甲基化水平的检测分析
    3.1 DNA甲基化检测原理
    3.2 DNA甲基化检测方法
        3.2.1 DNA样品前处理
        3.2.2 高效液相色谱条件优化及操作方法
        3.2.3 标准曲线的绘制
    3.3 试验结果与分析
        3.3.1 120#燃料油分散液试验结果与分析
        3.3.2 120#燃料油乳化液试验结果与分析
        3.3.3 120#燃料油分散液与乳化液试验结果对比
    3.4 讨论与结论
第4章 消油剂处理石油烃对海胆基因突变的检测分析
    4.1 PCR—SSCP技术检测原理
    4.2 目标基因的选择
    4.3 基因序列引物筛选
    4.4 聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳
    4.5 试验结果与分析
        4.5.1 基因组DNA的检测
        4.5.2 PCR引物扩增的检测
        4.5.3 PCR-SSCP的检测
        4.5.4 多态性的测序检测
        4.5.5 海胆基因突变率分析
    4.6 讨论与结论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：2925049