酸性多糖甲基化分析方法的改进.pdf

  本文关键词：酸性多糖甲基化分析方法的改进，由笔耕文化传播整理发布。

万方数据 万方数据 酸性多糖甲基化分析方法的改进 摘 要 酸性多糖中羧基和硫酸根等酸性基团的存在，影响了其在甲基化溶剂中的溶 解，致使甲基化程度往往较低，且糖醛酸中羧基的存在导致酸性多糖不易气化和 水解，，限制了其应用气相-质谱连用（GC - MS ）进行结构分析，制约了甲基化方 法在酸性多糖中的应用。本文对甲基化分析过程中出现的酸性多糖不易在甲基化 试剂中溶解和硫酸根位置不易确定等问题进行了研究，以含有糖醛酸和硫酸根的 酸性多糖标准品硫酸软骨素（CS ）为原料，对含有糖醛酸的酸性多糖还原的条 件进行优化，确定最佳的糖醛酸还原条件；对含有硫酸根的酸性多糖的脱硫方法 和其在甲基化试剂中的溶解性等问题进行了探讨，对比研究确定最佳的酸性多糖 甲基化条件，为酸性多糖的结构分析奠定基础。 首先以 CS 为研究对象，对糖醛酸羧基还原的方法进行改良。比较了钠型 和氢型 CS 样品分别在不同缓冲液体系、控制pH 值的条件下，还原率的高低。 结果显示，氢型 CS 在改良后的75% 四氢呋喃 - 0.1 mol/L 2 - 吗啉乙磺酸（THF - MES ）的缓冲液中，pH 4.75 和 50 ℃ 的条件下，采用碳二亚胺-硼氢化钠（EDC - NaBH ）法还原，糖醛酸还原率高达98% 以上，明显高于钠型。比较了不同检 4 测方法测定糖醛酸还原率的优劣，结果显示高效液相色谱（HPLC ）法快捷方便， 结果准确，是一种理想的糖醛酸还原率检测方法。将该方法应用于不同结构的酸 性多糖糖醛酸还原中，表明该方法具有普适性，不仅适用于 CS 类，同样适应 于透明质酸 （Hyaluronic Acid ）和肝素 （Heparin ）中糖醛酸还原，也适用于海洋 来源的聚甘露糖醛酸（Polymannuronic Acid ）及褐藻糖胶（Fucoidan ）中糖醛酸 的还原，为

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