节球藻毒素（Nodularin,NOD）在鲫鱼（Carassius auratus）体内的动态分布和毒理学研究

发布时间：2017-12-30 06:19

本文关键词：节球藻毒素（Nodularin,NOD）在鲫鱼（Carassius auratus）体内的动态分布和毒理学研究　出处：《上海海洋大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：节球藻毒素(NOD)是由泡沫节球藻(Nodularia spumigena)通过不同分子量的多酶复合物合成并分泌产生的一种环状五肽蓝藻肝毒素,可对人类、动物、植物和真核微生物产生不利影响。采用反相高效液相色谱分离配置紫外检测器检测,初步建立了一种鲫鱼肌肉、血浆、肝胰脏和肾脏组织中NOD含量的检测方法。将匀浆或剪碎后的鲫鱼组织用90%甲醇水溶液超声提取,离心,离心后取上清液加正己烷去脂,离心后弃上层正己烷相,下清液于40℃下氮吹接近吹干,用纯甲醇溶解并稀释至甲醇含量约10%,CNW Bond C18小柱净化除杂,洗脱液于40℃下氮吹吹干,纯甲醇溶解,溶液利用0.45μm的有机微孔滤膜进行过滤,取滤液20μL,238nm检测波长进行RP-HPLC检测。结果表明:NOD在肌肉和血浆组织中的检出限分别为11.30μg/kg和24.00μg/kg。肌肉、肝胰脏及肾脏中NOD为0.05~5.00 mg/kg,血浆中为0.05~5.00mg/L时,色谱峰峰面积与浓度呈良好的线性相关(R20.99)。各组织中NOD的平均回收率均在(87.93±14.38)%~(98.77±11.56)%,平均批内RSD为(1.12±0.99)%~(3.50±1.88)%。该检验方法可应用于鲫鱼体内NOD的动态分布以及残留检测,为其他水产品中NOD含量的检测以及水产品质量的安全控制提供了有效的工具。以0.25mg/kg和0.10mg/kg的给药剂量进行单次腹腔注射给药,研究了NOD在鲫鱼体内的动态分布。研究发现:两种给药剂量下,肝胰脏中NOD的含量变化范围分别为0.600~4.029mg/kg和0.229~0.753mg/kg;肾脏中NOD的含量变化范围分别为0.138~1.193mg/kg和0.160~0.725mg/kg;血浆中NOD的含量变化范围分别为0.118~0.406mg/kg和0.035~0.079mg/kg;肌肉中NOD的含量变化分别为0.035~0.074mg/kg和0.032~0.050mg/kg。NOD在鲫鱼四种组织中均有残留蓄积,且肝胰脏和肾脏组织中NOD的含量在所取时间点均高于初始注射剂量,四种组织对NOD蓄积能力的大小为肝胰脏肾脏血浆肌肉。因此可得,鲫鱼肝胰脏和肾脏为NOD的主要蓄积库,这为进一步探究NOD在其他淡水杂食性鱼类体内的动态分布奠定了基础。设计了A(空白对照)、B(甲醇对照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)5个实验组,研究了NOD对鲫鱼血细胞参数的影响,其中C、D、E三个实验组均采用单次腹腔注射给药,B组注射纯甲醇,A组不作任何处理作为空白对照,所有注射体积均按照鲫鱼的实际体重进行。研究发现:NOD对总白细胞(WBC)数目的影响不大,淋巴细胞(Lymph)数目以及单核细胞(Mon)数目有所增加,中性粒细胞(Gran)数目有所降低。淋巴细胞为鱼类主要的免疫细胞,单核细胞在鱼类的免疫功能中起到传递抗原的作用,产生这一现象的原因可能是NOD激活了鲫鱼体内的特异性免疫系统使得鱼体内的免疫细胞增加。红细胞(RBC)数目、血红蛋白(HGB)含量以及红细胞压积(HCT)为红细胞参数的3个重要指标,其他指标如平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)和红细胞分布宽度变异系数(RDW)均与其相关。结果表明,总红细胞数目、血红蛋白含量在短时间内有所降低,可能原因是NOD引起鱼类正常出血性贫血或NOD引起鱼体内组织器官出血,引发鱼体内的组织器官损伤。以鲫鱼(Carassius auratus)为实验对象,研究了NOD对鲫鱼肝胰脏生理生化的影响,设定实验组分别为A(空白对照)、B(甲醇对照)、C(0.05mg/kg)、D(0.10mg/kg)、E(0.25mg/kg)。其中C、D、E三个实验组均采用单次腹腔注射给药,B组注射纯甲醇,A组不作任何处理作为空白对照,所有注射体积均按照鲫鱼的实际体重进行。研究发现,NOD对鲫鱼肝胰脏CAT活力的影响,C、D、E三个剂量组中CAT均受到了诱导,其中C组CAT活力在第3h、24h和192h极显著高于对照组,第0.5h、12h显著高于对照组;D组中CAT活力在第3h、6h和24h极显著高于对照组,第0.5h和192h显著高于对照组,E组中CAT活力在第24h和48h极显著高于对照组,第0.5h和1h显著高于对照组。结果表明,在NOD的胁迫下,鲫鱼机体内产生了过量的活性氧自由基。NOD对鲫鱼肝胰脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性无明显的影响。鲫鱼肝胰脏GPX在低剂量组和中剂量组中均受到诱导,而在高剂量组中先受到诱导而后受到抑制,且抑制作用较为明显,产生这一现象的可能原因是高剂量组NOD在一定程度上对鲫鱼机体产生了一定的氧化损伤,使得机体的抗氧化能力降低。还原型谷胱甘肽(GSH)作为GPX的底物,低剂量组和高剂量组中GSH含量均低于对照组,而中剂量组中呈现先降低后升高的趋势,可能原因是在NOD注射一定时间之后,鲫鱼机体对NOD有解毒作用,而高剂量组中GSH含量保持在较低水平表明鲫鱼机体内氧化损伤增加,抗氧化能力降低。低、中、高三个剂量组中丙二醛(MDA)含量总体上均比空白对照组高,且高剂量组在24~192h之间MDA含量与空白对照组有显著差异,这说明在NOD胁迫下,鲫鱼机体内可能发生了脂质过氧化作用,NOD会造成鲫鱼机体的细胞损伤,但这种损伤没有明显的剂量依赖效应。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：上海海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：X171.5;X52

【参考文献】