脂肪酶在毕赤酵母中的表达及其在餐厨废弃油脂转化中的应用

发布时间：2018-02-14 10:47

  本文关键词： 餐厨废弃油脂 生物柴油 米根霉 脂肪酶 毕赤酵母 转酯化反应　出处：《暨南大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：利用脂肪酶将餐厨废弃油脂转化为生物柴油能够实现餐厨垃圾的绿色化、资源化利用。本研究构建了能表达脂肪酶的基因重组毕赤酵母,利用重组酵母表达的脂肪酶替代传统化学催化剂,以绿色无毒的乙醇替代甲醇作为酰基受体进行转酯化反应生产生物柴油。本研究从米根霉(Rhizopus oryzae)CICC3005 c DNA文库扩增得到脂肪酶基因(proROL),克隆进毕赤酵母表达载体pGAPZαA,电转入毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中,筛选得到重组脂肪酶活性较高的阳性克隆Pichia pastoris-proROL,并对所表达的重组脂肪酶的酶学特性进行了研究。重组脂肪酶最高酶活为426.6 U/mL;最适pH为pH 8.0,酶活在pH 6.0-8.0范围内稳定;最适温度为30℃,酶活在30-35℃之间稳定。重组脂肪酶酶活被金属离子Mn~(2+)、Zn~(2+)、Na+、K+促进,被0.001%的Triton X-100和0.01%的SDS促进,对甲醇、甲苯和正己烷具有较高的耐受性。重组脂肪酶对8C和14C碳链长度的底物表现出较强的偏好性。以餐厨废弃油脂为原料,以无水乙醇为酰基受体,以重组脂肪酶为催化剂进行转酯化反应生产生物柴油,研究了水含量、醇油摩尔比和酶添加量对转酯化反应效率的影响,在水含量为5%,醇油摩尔比为4:1,酶添加量为10%的条件下转酯化反应效率最高,此时生物柴油最高得率为49%。本研究构建了能表达脂肪酶的重组毕赤酵母,并以重组脂肪酶替代传统化学催化剂,以乙醇替代甲醇作为酰基受体生产生物柴油,减少了化学试剂的使用,能节约成本,降低对环境的污染,为今后餐厨垃圾的绿色化、资源化利用开辟了一条新途径。
[Abstract]:This study constructed a recombinant Pichia pastoris which can express lipase . The recombinant lipase was used instead of traditional chemical catalyst . The optimum temperature was 30 鈩，

本文编号：1510532