镉诱导文蛤鳃细胞凋亡检测及金属硫蛋白的作用机制

发布时间：2020-06-28 14:41

【摘要】：采用急性毒性法将文蛤暴露于不同Cd~(2+)浓度(0、1.5、3、6、12mg/L)中染毒5天,用形态学、生化及分子生物学手段和方法检测Cd~(2+)对文蛤鳃细胞凋亡程度以及金属硫蛋白(MT)的作用特点。结果显示:随着Cd~(2+)浓度的上升,DNA梯形条带数增多且逐渐清晰;AO/EB双荧光染色后细胞由绿色过渡为橙黄色甚至红色,细胞凋亡率不断上升。Cd~(2+)对文蛤鳃丝、鳃水管和鳃上皮等产生损伤作用;随Cd~(2+)浓度的增加,细胞变形及膜性结构囊泡化严重,线粒体嵴减少,并出现溶酶体。鳃中ROS含量、DNA-蛋白质交联率(DPC)均随Cd~(2+)浓度的上升而上升,呈浓度-剂量效应关系;但蛋白质羰基(PCO)含量随Cd~(2+)浓度的增大呈先升后降的趋势;各Cd~(2+)染毒组的Caspase-3,8,9活性均被显著激活。随Cd~(2+)浓度的升高,SOD、CAT和GPx酶活及MT m RNA表达量均呈先升后降的趋势;超微量Na~+-K~+、Ca~(2+)-Mg~(2+)和总ATP酶活轻度受抑制。MT m RNA表达量与PCO具极显著的相关,与Caspase-3相关显著。镉能导致文蛤鳃细胞产生大量的自由基,使细胞膜性结构特别是线粒体结构损伤很大,影响正常的生理功能,出现氧化损伤甚至凋亡。MT能调控PCO含量变化,并能调控Caspase-3基因在线粒体介导的内源性细胞凋亡途径中发挥作用。
【学位授予单位】：温州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：X171.5
【图文】：

文蛤,鳃组织,横切,鳃丝

图 2-1 文蛤鳃组织横切图Tab. 2-1 Clam gill tissue cross sectionA: 0mg/L，10 倍; B：1.5mg/L，10 倍; C：3mg/L，120 倍; B2：1.5mg/L，20 倍; C2：3mg/L，20 倍; D2:tube）；Bf：鳃丝（branchial filament）；鳃丝是文蛤鳃的主要组成成分，横要由角质层、上皮层和基膜构成(图 2-1由单层低柱状上皮细胞和结缔组织构成横切片结果显示，对照组中鳃丝纹理清柱状上皮细胞，基膜较厚，细胞核呈椭平的上皮细胞，基膜较薄，排列较松散较粗( 图 2-1A、A2)。鳃丝前后两部分单中部单层扁平的上皮细胞变化不明显(图前后两部分的单层柱状上皮细胞变小，中也相对减小，鳃组织边缘的细胞减少，C2 和图 2-1 D、D2)。12mg/L 质量浓度核变形出现固缩现象(图 2-1 E、E2)。

文蛤,鳃组织,纵切,鳃孔

图 2-2 文蛤鳃组织纵切图Tab. 2-2 Clam gill tissue longitudinal sectionA: 0mg/L，10 倍; B1.1：1.5mg/L，10 倍; C：3mg/L，20 倍; B2：1.5mg/L，20 倍; C2：3mg/L，20 倍; D2:tube）；Bf：鳃丝（branchial filament）；文蛤鳃石蜡组织纵切片结果显示，（Wt）的入口，鳃孔纵向平行排列( 图度组鳃孔壁与其对照组相比无明显变化质量浓度组鳃丝多为单个的，连续性较少质量浓度组鳃孔壁厚度增大，鳃腔相对(图 2-2 E、E2)。观察染毒不同质量浓度型向短粗型转化，细胞空泡化现象随浓度和溃烂。2.1.2 镉对文蛤鳃超微结构分析对照组文蛤鳃细胞核（N）呈圆形或

【参考文献】