适配体作为一种新型生物识别分子,本质是一段能够通过相应的结构变化与靶标分子以高亲和力和高特异性结合的寡核苷酸序列。适配体的筛选是在体外通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)完成的,筛选得到的适配体在测定序列后,即可在一定的化学条件下重复合成用于进一步的研究,合成条件可控并且合成适配体的性能均一,不受合成批次的影响。相比于目前常用的生物识别分子---抗体,适配体除了易合成、性能均一外,还具有靶标范围更广(理论上包括毒性物质在内的各种小分子、大分子、细胞甚至生物组织)、生物稳定性更好、更易于标记修饰且改造后仍可保持良好的生物功能活性等独特优势,这都使得适配体成为近几年分析领域的研究热点,并与多种分析技术相结合,成功应用于比色、荧光、电化学等多种分析检测方法的开发。本研究以适配体技术为基础结合纳米金,首次建立了一种利用特定适配体同时检测6种有机磷农药的纳米金比色快速检测方法;对适配体进行优化,基于片段化适配体荧光淬灭机理建立了特异性良好的19-去甲基睾酮快速检测方法;对纳米金粒径对检测灵敏度的影响进行研究,建立了一种快速有效的灭蝇胺纳米金比色检测方法。主要研究内容包括以下三部分:1.利用一段可与特定有机磷农药特异性结合的55个碱基长度序列的适配体结合纳米金比色技术,首次建立了基于适配体-纳米金比色原理的6种有机磷农药快速检测方法,并成功应用于河水实际样品中有机磷农药的检测,虽然方法的灵敏度还有待提高,但为适配体技术在农药残留快速检测方法中的应用提供了新的思路。2.在本课题组关于适配体长度对适配体纳米金比色法灵敏度影响的研究基础之上,我们发现原长度76个碱基的17β-雌二醇适配体在片段化后对19-去甲基睾酮具有很强的亲和性,这可能是因为二者的结构相似,而目前针对19-去甲基睾酮的特异性适配体并未有筛选成功的报道。因此,我们将17β-雌二醇适配体的片段P1和P2分别标记荧光淬灭基团BHQ和荧光基团6FAM,建立了一种简单的基于荧光共振能量转移原理的夹心荧光检测法,实现了对19-去甲基睾酮的有效检测。该方法在1μM-1000μM荧光强度与浓度对数呈负相关,优化后方法的检测限为5μM,并在尿液实际样品中成功应用,3个加标浓度下所得加标回收率为57.94%-118.76%,平均RSD小于7%,方法具有较好的重复性和稳定性。3.建立了基于纳米金比色的灭蝇胺可视化检测方法。通过比较一系列不同粒径(13nm、16nm、30nm、35nm)的纳米金溶液的方法灵敏度,最终确定该可视化检测灭蝇胺的方法中纳米金的最佳反应粒径为30nm。该方法利用了灭蝇胺自身的结构特性以及与纳米金之间的结合特性,在未引入任何额外特定受体的情况下,向纳米金溶液中加入灭蝇胺后颜色即可由红变蓝,结果直观肉眼可见,也可用紫外分光光度计检测到相应吸光度值的变化,从而建立了超快速的灭蝇胺比色检测方法并在河水实际样品中得以应用。
【学位单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：O657.3;X832
【参考文献】
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3 陈爱亮;陈刚;于洪侠;邱静;赵燕;杨曙明;;适配体制备技术及其在农产品化学污染物检测中的应用[J];农产品质量与安全;2012年04期
4 梁淼;刘锐;苏荣欣;齐崴;王利兵;何志敏;;面向食品安全分析的核酸适配体传感技术[J];化学进展;2012年07期
5 范婷;张娟琨;李敏;傅晶晶;孙坤;李欧文;;适配子生物传感器对青霉素的快速检测[J];生物加工过程;2011年03期
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7 姜金庆;张海棠;王自良;;19-去甲睾酮免疫学检测方法的筛选和优化[J];生物技术;2010年05期
8 吴海燕;陈建军;;蔬菜中多种有机磷农药残留气相色谱分析法[J];食品与机械;2010年04期
9 王国庆;陈兆鹏;陈令新;;基于核酸适配体和纳米粒子的光学探针[J];化学进展;2010年Z1期
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1 吕珍珍;基于核酸适配体的非标记荧光检测方法研究[D];四川农业大学;2014年
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2816779
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