PM暴露致小鼠血管损伤及其机制初步探索
发布时间：2021-01-26 01:41
目的:以Nrf2敲除小鼠为模型,采用IVC系统模拟外界PM真实暴露,观察PM暴露对小鼠血管损伤及机制初步探索。方法:在河北省石家庄,利用独立通气笼（IVC系统）,对小鼠进行42天的PM染毒,小鼠PM暴露每天16小时。Nrf2基因敲除型和野生型小鼠各80只,随机分为四组（野生型染毒组（WTE）,野生型对照组（WTC）,敲除型染毒组（KOE）,敲除型对照组（KOC））,每组各40只。每天早、中、晚三次用TSI手持式环境粉尘检测仪对笼内和外界大气中的颗粒物浓度进行检测并做记录。实验结束后处死小鼠,取小鼠主动脉做病理切片观察,采用qRT-PCR方法对各组小鼠血管组织中基因（ABCA1、Dag1、BMP2、TGFβ、AKT1、MAPK、DDIT3、PRKCB、PPP2CB、ACE、AT1R和AGT）的mRNA表达水平检测,酶联免疫法（ELISA）检测血清血管紧张素II（AngII）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达量;采用免疫组化方法检测血管组织中的ACE和AT1R蛋白水平;采用Western-blot方法检测血管组织AT1R蛋白水平。结果:1.室外和IVC系统笼内PM浓度及粒径情况,室外...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
实验材料和方法
1 实验动物
2 主要仪器和试剂
3 动物饲料配方
4 实验动物分组及处理
5 标本的收集与处理
6 检测分析
6.1 小鼠的一般状况
6.2 脏器系数
6.3 血常规检测
6.4 小鼠主动脉组织病理切片
6.5 免疫组化
6.5.1 蜡块包埋
6.5.2 操作步骤
6.6 荧光实时定量PCR测定主动脉血管平滑肌增殖相关基因mRNA的表达
6.6.1 血管总RNA的提取
6.6.2 mRNA浓度测定
6.6.3 RNA完整性检测
6.6.4 逆转录为cDNA
6.6.5 荧光实时定量PCR（qRT-PCR）
6.6.6 qRT-PCR结果计算
6.7 Elisa方法对血清进行检测
6.8 Western-blot法检测小鼠血管组织中AT1R蛋白的表达水平
6.8.1 主动脉血管组织蛋白样品
6.8.2 BCA法测定蛋白浓度
6.8.3 Western-blot检测AT1R蛋白
7 统计分析
结果
1 染毒笼内PM颗粒物粒径分布情况
2 室外大气与染毒笼内PM2.5 浓度变化
3 各组小鼠一般状况
4 各组小鼠脏器系数水平
5 各组小鼠血常规检测结果
6 各组小鼠主动脉HE染色结果
7 各组小鼠主动脉血管平滑肌增殖相关基因mRNA表达水平
7.1 ACE mRNA表达结果
7.2 AGT mRNA表达结果
7.3 AT1R mRNA表达结果
8 免疫组化分析血管紧张素相关因子ACE和 AT1R表达情况
8.1 AT1R免疫组化结果
8.2 ACE免疫组化结果
9 Western-blot法检测小鼠组织中AT1R蛋白的表达
10 Elisa法检测血清中MCP-1和AngII的表达
10.1 Elisa法检测血清中MCP-1 的表达
10.2 Elisa法检测血清中AngII的表达
讨论
结论
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录 （缩略词表）
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]细颗粒物(PM2.5)对心肌梗死的影响[J]. 袁鹏辉,吴书慧,朱敏洁,郑云洁. 华中科技大学学报(医学版). 2018(06)
[2]乙酰水杨酸姜黄素酯对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响及相关机制[J]. 孙四玉,杨冬梅,戴娜,夏伯候,庹勤慧. 湖南中医药大学学报. 2017(11)
[3]PM2.5致心肺损伤的研究[J]. 欧敏,王聪琳,许文祝,吴成年,邓火金. 医学综述. 2017(19)
[4]核转录相关因子-2信号通路对重金属中毒调控作用的研究进展[J]. 康嘉懿,邓宇. 环境与健康杂志. 2017(08)
[5]血管紧张素Ⅱ与氧化应激在阿霉素心脏毒性中的作用[J]. 涂文程,于勤. 大连大学学报. 2017(03)
[6]白藜芦醇对PM2.5诱导的内皮细胞氧化应激和凋亡的保护作用[J]. 刘方芳,金瑶,李明,吴彤,王芳,邝枣园,李岩. 中药新药与临床药理. 2017(03)
[7]PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及机制[J]. 王芳,李岩,卢昕烁,杨杰波,刘方芳,余雪松,李明. 中国病理生理杂志. 2017(03)
[8]姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖及氧化应激的影响[J]. 王琛,孟哲,马艳秋,李泽,陶海龙,白中乐,李凌. 西安交通大学学报(医学版). 2016(03)
[9]无锡市冬季典型天气PM2.5中碳组分的污染特征[J]. 云龙龙,陆钒,张天舒,伍德侠,盛世杰,陆亦怀,刘建国. 环境科学. 2014(09)
[10]PM2.5暴露诱发动脉粥样硬化斑块失稳定发病机制及应对策略思考[J]. 李玉洁,陈颖,王娅杰,药红梅,杨庆,翁小刚,朱晓新,李汉卿,刘栩岑,周冰冰,郭琰. 中国中药杂志. 2014(15)
博士论文
[1]PM2.5成分与高血压相关心脑血管疾病急诊的关系及对RAS基因表达的影响[D]. 黄志军.中南大学 2012
[2]细胞内ROS水平改变对细胞活性及相关信号传导途径的影响[D]. 秦勇.浙江大学 2012
[3]甲基莲心碱对人血管平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响及机制初探[D]. 李晓春.浙江大学 2010
硕士论文
[1]PM2.5暴露对支气管上皮细胞线粒体功能的影响及靶基因调控研究[D]. 张鑫.东南大学 2016
[2]PM2.5致人脐静脉内皮细胞氧化损伤及白藜芦醇的干预效应研究[D]. 李利忠.中国人民解放军军事医学科学院 2016
[3]重组人促红细胞生成素抑制自噬减轻心肌微血管内皮细胞氧化应激损伤[D]. 连晓鹏.山西医科大学 2016
[4]烟雾萃取剂和氧化应激对血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖的影响[D]. 李天佳.北京协和医学院 2013
[5]高剂量AngII对血管内皮细胞ACE、ACE2表达的影响及其分子机制[D]. 陈欢.南方医科大学 2013
[6]颗粒物和多环芳烃的暴露在不同Framingham风险评分人群中对心率变异性的影响[D]. 冯莹莹.华中科技大学 2013
[7]细颗粒物对人脐静脉内皮细胞ACE、AT1R基因表达的影响[D]. 蔡明.中南大学 2012
[8]皂苷C抑制血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖作用及其机制研究[D]. 洪丹.中南大学 2011
[9]复合抗氧化剂对动物氧化应激与自由基代谢的影响[D]. 韩雪.上海交通大学 2010
[10]血管紧张素-（1-7）对大鼠血管功能和增殖的调控[D]. 钟健.第三军医大学 2002
本文编号：3000253
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
引言
实验材料和方法
1 实验动物
2 主要仪器和试剂
3 动物饲料配方
4 实验动物分组及处理
5 标本的收集与处理
6 检测分析
6.1 小鼠的一般状况
6.2 脏器系数
6.3 血常规检测
6.4 小鼠主动脉组织病理切片
6.5 免疫组化
6.5.1 蜡块包埋
6.5.2 操作步骤
6.6 荧光实时定量PCR测定主动脉血管平滑肌增殖相关基因mRNA的表达
6.6.1 血管总RNA的提取
6.6.2 mRNA浓度测定
6.6.3 RNA完整性检测
6.6.4 逆转录为cDNA
6.6.5 荧光实时定量PCR（qRT-PCR）
6.6.6 qRT-PCR结果计算
6.7 Elisa方法对血清进行检测
6.8 Western-blot法检测小鼠血管组织中AT1R蛋白的表达水平
6.8.1 主动脉血管组织蛋白样品
6.8.2 BCA法测定蛋白浓度
6.8.3 Western-blot检测AT1R蛋白
7 统计分析
结果
1 染毒笼内PM颗粒物粒径分布情况
2 室外大气与染毒笼内PM2.5 浓度变化
3 各组小鼠一般状况
4 各组小鼠脏器系数水平
5 各组小鼠血常规检测结果
6 各组小鼠主动脉HE染色结果
7 各组小鼠主动脉血管平滑肌增殖相关基因mRNA表达水平
7.1 ACE mRNA表达结果
7.2 AGT mRNA表达结果
7.3 AT1R mRNA表达结果
8 免疫组化分析血管紧张素相关因子ACE和 AT1R表达情况
8.1 AT1R免疫组化结果
8.2 ACE免疫组化结果
9 Western-blot法检测小鼠组织中AT1R蛋白的表达
10 Elisa法检测血清中MCP-1和AngII的表达
10.1 Elisa法检测血清中MCP-1 的表达
10.2 Elisa法检测血清中AngII的表达
讨论
结论
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间的研究成果
附录 （缩略词表）
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]细颗粒物(PM2.5)对心肌梗死的影响[J]. 袁鹏辉,吴书慧,朱敏洁,郑云洁. 华中科技大学学报(医学版). 2018(06)
[2]乙酰水杨酸姜黄素酯对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响及相关机制[J]. 孙四玉,杨冬梅,戴娜,夏伯候,庹勤慧. 湖南中医药大学学报. 2017(11)
[3]PM2.5致心肺损伤的研究[J]. 欧敏,王聪琳,许文祝,吴成年,邓火金. 医学综述. 2017(19)
[4]核转录相关因子-2信号通路对重金属中毒调控作用的研究进展[J]. 康嘉懿,邓宇. 环境与健康杂志. 2017(08)
[5]血管紧张素Ⅱ与氧化应激在阿霉素心脏毒性中的作用[J]. 涂文程,于勤. 大连大学学报. 2017(03)
[6]白藜芦醇对PM2.5诱导的内皮细胞氧化应激和凋亡的保护作用[J]. 刘方芳,金瑶,李明,吴彤,王芳,邝枣园,李岩. 中药新药与临床药理. 2017(03)
[7]PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及机制[J]. 王芳,李岩,卢昕烁,杨杰波,刘方芳,余雪松,李明. 中国病理生理杂志. 2017(03)
[8]姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖及氧化应激的影响[J]. 王琛,孟哲,马艳秋,李泽,陶海龙,白中乐,李凌. 西安交通大学学报(医学版). 2016(03)
[9]无锡市冬季典型天气PM2.5中碳组分的污染特征[J]. 云龙龙,陆钒,张天舒,伍德侠,盛世杰,陆亦怀,刘建国. 环境科学. 2014(09)
[10]PM2.5暴露诱发动脉粥样硬化斑块失稳定发病机制及应对策略思考[J]. 李玉洁,陈颖,王娅杰,药红梅,杨庆,翁小刚,朱晓新,李汉卿,刘栩岑,周冰冰,郭琰. 中国中药杂志. 2014(15)
博士论文
[1]PM2.5成分与高血压相关心脑血管疾病急诊的关系及对RAS基因表达的影响[D]. 黄志军.中南大学 2012
[2]细胞内ROS水平改变对细胞活性及相关信号传导途径的影响[D]. 秦勇.浙江大学 2012
[3]甲基莲心碱对人血管平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响及机制初探[D]. 李晓春.浙江大学 2010
硕士论文
[1]PM2.5暴露对支气管上皮细胞线粒体功能的影响及靶基因调控研究[D]. 张鑫.东南大学 2016
[2]PM2.5致人脐静脉内皮细胞氧化损伤及白藜芦醇的干预效应研究[D]. 李利忠.中国人民解放军军事医学科学院 2016
[3]重组人促红细胞生成素抑制自噬减轻心肌微血管内皮细胞氧化应激损伤[D]. 连晓鹏.山西医科大学 2016
[4]烟雾萃取剂和氧化应激对血管内皮细胞和平滑肌细胞增殖的影响[D]. 李天佳.北京协和医学院 2013
[5]高剂量AngII对血管内皮细胞ACE、ACE2表达的影响及其分子机制[D]. 陈欢.南方医科大学 2013
[6]颗粒物和多环芳烃的暴露在不同Framingham风险评分人群中对心率变异性的影响[D]. 冯莹莹.华中科技大学 2013
[7]细颗粒物对人脐静脉内皮细胞ACE、AT1R基因表达的影响[D]. 蔡明.中南大学 2012
[8]皂苷C抑制血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖作用及其机制研究[D]. 洪丹.中南大学 2011
[9]复合抗氧化剂对动物氧化应激与自由基代谢的影响[D]. 韩雪.上海交通大学 2010
[10]血管紧张素-（1-7）对大鼠血管功能和增殖的调控[D]. 钟健.第三军医大学 2002
本文编号：3000253
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