基于RPA和ECL的生物气溶胶核酸检测方法研究

发布时间：2021-04-20 15:39

　　气溶胶态病原体主要包括病毒和细菌（生物气溶胶）,由于气溶胶粒径小常悬浮于空气中,因此,生物气溶胶病原体容易造成呼吸道传染性疾病的大规模爆发。生物气溶胶采样对传染性疾病的防控尤为重要,目前传统的生物气溶胶采样方法主要有自然沉降法、冲击法、撞击法、采样膜法等。采样膜法由于采样效率高,常被用于空气采样。FTA卡（Flinders Technology Associates）适用血液、口腔拭子、上皮细胞、细菌、病毒和培养细胞等多种样品的保藏,可与核酸结合,维持样品中DNA的完整性。目前尚未见利用FTA卡进行生物气溶胶病原体采集的报道。生物气溶胶病原体常用检测方法主要包括细胞培养菌落计数法、免疫检测法和核酸检测法。细胞培养菌落计数法需依靠人工操作,耗时费力,细胞培养超过24 h,不能实现自动化快速检测。免疫检测法对样本的处理相对较为简便,但是复杂样本的检测,存在交叉污染等问题。近年来,核酸分子检测技术在临床医疗、疾病防控等领域发挥越来越重要的作用,如聚合酶链式反应（PCR）、荧光原位杂交技术（FISH）、基因测序技术等。但传统PCR方法由于需依靠精密的仪器以精确控制温度的变化,并且由专业技术人员... 

【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
    1.1 常见的空气气溶胶态病原体
        1.1.1 病毒
        1.1.2 细菌
    1.2 气溶胶病原体采样方法研究进展
        1.2.1 传统采样方法
        1.2.2 新型采样技术
    1.3 FTA技术原理及应用
    1.4 空气气溶胶病原体检测方法
        1.4.1 细胞培养菌落计数法
        1.4.2 免疫检测法
        1.4.3 分子核酸检测法
        1.4.4 其它检测技术
        1.4.5 空气病原体采样检测的难点
    1.5 恒温扩增技术介绍及应用
        1.5.1 环介导等温扩增技术
        1.5.2 重组聚合酶扩增技术
    1.6 电化学发光（ECL）原理及应用
        1.6.1 湮灭式ECL
        1.6.2 共反应物式ECL
    1.7 本课题研究意义及技术路线
        1.7.1 研究意义
        1.7.2 技术路线
第二章 基于FTA卡的生物气溶胶采样系统构建
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 气溶胶采样系统构建
        2.3.2 含HBV基因质粒的大肠杆菌培养、质粒提取及浓度测定
        2.3.3 FTA卡采集气溶胶HBV质粒及样本洗脱
        2.3.4 引物设计
        2.3.5 FTA卡HBV质粒样本检测
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 气溶胶发生器相关特性表征
        2.4.2 FTA卡采样效果评估
        2.4.3 FTA卡HBV质粒检测结果
    2.5 本章小结
第三章 基于重组聚合酶扩增和纸基电化学发光的核酸检测方法
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 三联吡啶钌标记引物
        3.3.2 重组聚合酶扩增反应参数优化
        3.3.3 纸基电化学发光检测扩增核酸
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 三联吡啶钌标记引物及表征
        3.4.2 重组聚合酶扩增反应相关条件优化结果
        3.4.3 链霉亲和素磁珠对电化学发光检测的影响
        3.4.4 纸基电化学发光响应特性
    3.5 本章小结
第四章 基于FTA—RPA—ECL方法检测HBV血清样本
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验试剂
        4.2.2 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 基于FTA-RPA-ECL方法检测HBV血清样本
        4.3.2 基于实时荧光定量PCR方法检测HBV血清样本
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 纸基电化学发光响应特性
        4.4.2 HBV血清样本检测结果分析
    4.5 本章小结
结论与展望
    一、结论
    二、不足与展望
    三、本论文的创新之处
    四、本研究应用价值
参考文献
攻读博士/硕士学位期间取得的研究成果
致谢
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光定量PCR法与酶联免疫吸附法在乙型肝炎病毒检测中的应用[J]. 张辉,吴冬生,方敏,董丽.  解放军预防医学杂志. 2017(11)
[2]一种基于磁性石墨烯的纸基电化学发光夹心免疫分析方法[J]. 陈钰,王捷,刘仲明.  分析化学. 2017(10)
[3]等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用[J]. 高瑶,孟星宇,罗玉子,胡永浩,仇华吉.  动物医学进展. 2017(08)
[4]核酸等温扩增技术在微生物快速检测中的研究进展[J]. 王大洲,郭天笑,郑实,商颖,许文涛.  生物技术通报. 2017(07)
[5]分子生物学技术在病原菌快速检测中的应用进展[J]. 张妮,徐丁.  国际儿科学杂志. 2017 (05)
[6]洁净手术室空气微生物采样方法及采样布点的探讨[J]. 沈元,游颖琦,兰策介,王荷生.  中国消毒学杂志. 2016(11)
[7]重组酶聚合酶扩增技术在疾病快速检测中的研究进展[J]. 樊晓旭,赵永刚,李林,吴晓东,王志亮.  中国动物检疫. 2016(08)
[8]社区获得性肺炎病原体检测方法研究进展[J]. 蒋露晰,任红宇,周海健,陈愉,邵祝军,秦天.  中华流行病学杂志. 2016 (07)
[9]基于单螺旋微流控芯片的细菌气溶胶的高效富集[J]. 蓝英,徐娟,卞晓军,赵勇,潘迎捷,张炜佳.  分析测试学报. 2016(06)
[10]军团菌感染实验室检测与预防新进展[J]. 魏贺玺.  医疗装备. 2016(08)

博士论文
[1]一种新型核酸恒温扩增方法的研究及其在现场检测中的应用[D]. 董德荣.中国人民解放军军事医学科学院 2016

硕士论文
[1]基于碳纳米材料电化学发光生物传感器的研究与应用[D]. 吴鲁丹.济南大学 2016



本文编号：3149955