多溴联苯醌诱导parthanatos样细胞死亡、铁自噬和铁死亡的发生以及毒性机制分析
发布时间：2022-08-02 17:06
多溴联苯醚（PBDEs）是一类现在仍被广泛使用的溴系阻燃剂,具有生物蓄积能力,目前大量存在于生物体和非生物体内,并且已被证明能严重危害人类健康。多溴联苯醌（PBDEQ）是卤代芳香烃类化合物PBDEs的代谢产物。作为一种醌类物质,PBDEQ比PBDEs生物活性更高。一般来说,醌（例如:1,4-苯醌、多氯联苯醌、双酚A醌和多环芳烃氢醌）能同DNA进行Michael加成反应,除此之外,醌类物质也能通过半醌自由基或者对苯二酚-半醌类化合物在氧化还原循环中产生活性氧,进而引起氧化应激反应,最终诱导细胞毒性,遗传毒性等毒性作用。第一部分:PBDEQ诱导Hela细胞产生遗传毒性。在本章实验中我们发现PBDEQ具有遗传毒性。首先我们在黄丽华等描述的方法基础上稍加改进合成了2,4-二溴联苯醌。然后利用彗星实验检测DNA损伤,发现同对照组相比PBDEQ组细胞彗星拖尾明显,DNA损伤严重。利用微核实验检测染色体损伤,实验结果显示,同对照组相比PBDEQ组细胞微核率显著升高,PBDEQ严重损伤细胞染色体。利用8-OHdG释放实验检测DNA氧化损伤,发现PBDEQ刺激细胞内8-OHdG量显著升高,PBDEQ诱导...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写符号对照表
第一章 绪论
1.1 引言
1.2 多溴联苯醚
1.3 多溴联苯醚的代谢
1.4 2，4-二溴联苯醌
1.5 遗传物质损伤
1.6 Parthanatos细胞死亡
1.7 自噬
1.8 铁自噬
1.9 铁死亡
1.10 立题意义
第二章 PBDEQ诱导Hela细胞产生遗传毒性
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.2.3 常用溶液配制
2.3 实验方法
2.3.1 2，4-二溴联苯醌（PBDEQ）的合成与表征。
2.3.2 细胞培养
2.3.3 western blot实验
2.3.4 免疫荧光实验
2.3.5 彗星实验
2.3.6 微核实验
2.3.7 8-OHd G释放实验
2.3.8 统计分析
2.4 实验结果
2.4.1 合成并鉴定PBDEQ
2.4.2 PBDEQ损伤Hela细胞的DNA
2.4.3 PBDEQ损伤Hela细胞染色体
2.5 讨论
第三章 PBDEQ诱导细胞发生PARP-1 介导的parthanatos样细胞死亡研究
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验试剂
3.3 实验方法
3.3.1 细胞存活率检测实验
3.3.2 活性氧检测实验
3.3.3 LDH释放实验
3.3.4 细胞凋亡检测实验
3.3.5 TUNEL实验
3.3.6 线粒体膜电位(MMP)检测实验
3.3.7 western bolt实验
3.3.8 免疫荧光实验
3.3.9 统计分析
3.4 实验结果
3.4.1 PBDEQ诱导Hela细胞产生细胞毒性
3.4.2 PBDEQ诱导Hela细胞发生氧化损伤
3.4.3 PBDEQ诱导Hela细胞发生parthanatos样细胞死亡
3.4.4 PBDEQ诱导Hela细胞发生的parthanatos样细胞死亡依赖于ROS产ROS产生和PARP-1 的激活
3.4.5 PBDEQ诱导Hela细胞发生的parthanatos样细胞死亡不依赖于caspasecaspase家族
3.5 讨论
第四章 PBDEQ诱导铁自噬发生
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验仪器
4.2.2 实验试剂
4.3 实验方法
4.3.1 细胞培养
4.3.2 western blot实验
4.3.3 SiRNA转染
4.3.4 免疫荧光实验
4.3.5 谷胱甘肽（GSH）含量检测实验
4.3.6 ROS检测实验
4.3.7 荧光定量PCR实验
4.3.8 数据分析
4.4 实验结果
4.4.1 PBDEQ诱导自噬发生
4.4.2 PBDEQ通过ROS介导自噬的发生
4.4.3 PBDEQ通过诱导自噬降解铁蛋白激活铁自噬通路
4.4.4 PBDEQ介导发生的铁自噬需要NCOA4参与
4.5 讨论
第五章 PBDEQ诱导铁死亡发生
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验仪器
5.2.2 实验试剂
5.3 实验方法
5.3.1 细胞存活率检测实验
5.3.2 Western blot实验
5.3.3 二价铁离子染色实验
5.3.4 二价铁离子检测实验
5.3.5 PI染色实验
5.3.6 线粒体染色实验
5.4 实验结果
5.4.1 PBDEQ诱导细胞内铁离子含量升高
5.4.2 PBDEQ通过ROS诱导PC12细胞发生铁死亡
5.4.3 PBDEQ诱导的铁自噬促进铁死亡的发生
5.5 讨论
全文总结
参考文献
致谢
作者攻读硕士学位期间已发表科研成果
本文编号：3668911
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写符号对照表
第一章 绪论
1.1 引言
1.2 多溴联苯醚
1.3 多溴联苯醚的代谢
1.4 2，4-二溴联苯醌
1.5 遗传物质损伤
1.6 Parthanatos细胞死亡
1.7 自噬
1.8 铁自噬
1.9 铁死亡
1.10 立题意义
第二章 PBDEQ诱导Hela细胞产生遗传毒性
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.2.3 常用溶液配制
2.3 实验方法
2.3.1 2，4-二溴联苯醌（PBDEQ）的合成与表征。
2.3.2 细胞培养
2.3.3 western blot实验
2.3.4 免疫荧光实验
2.3.5 彗星实验
2.3.6 微核实验
2.3.7 8-OHd G释放实验
2.3.8 统计分析
2.4 实验结果
2.4.1 合成并鉴定PBDEQ
2.4.2 PBDEQ损伤Hela细胞的DNA
2.4.3 PBDEQ损伤Hela细胞染色体
2.5 讨论
第三章 PBDEQ诱导细胞发生PARP-1 介导的parthanatos样细胞死亡研究
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验试剂
3.3 实验方法
3.3.1 细胞存活率检测实验
3.3.2 活性氧检测实验
3.3.3 LDH释放实验
3.3.4 细胞凋亡检测实验
3.3.5 TUNEL实验
3.3.6 线粒体膜电位(MMP)检测实验
3.3.7 western bolt实验
3.3.8 免疫荧光实验
3.3.9 统计分析
3.4 实验结果
3.4.1 PBDEQ诱导Hela细胞产生细胞毒性
3.4.2 PBDEQ诱导Hela细胞发生氧化损伤
3.4.3 PBDEQ诱导Hela细胞发生parthanatos样细胞死亡
3.4.4 PBDEQ诱导Hela细胞发生的parthanatos样细胞死亡依赖于ROS产ROS产生和PARP-1 的激活
3.4.5 PBDEQ诱导Hela细胞发生的parthanatos样细胞死亡不依赖于caspasecaspase家族
3.5 讨论
第四章 PBDEQ诱导铁自噬发生
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 实验仪器
4.2.2 实验试剂
4.3 实验方法
4.3.1 细胞培养
4.3.2 western blot实验
4.3.3 SiRNA转染
4.3.4 免疫荧光实验
4.3.5 谷胱甘肽（GSH）含量检测实验
4.3.6 ROS检测实验
4.3.7 荧光定量PCR实验
4.3.8 数据分析
4.4 实验结果
4.4.1 PBDEQ诱导自噬发生
4.4.2 PBDEQ通过ROS介导自噬的发生
4.4.3 PBDEQ通过诱导自噬降解铁蛋白激活铁自噬通路
4.4.4 PBDEQ介导发生的铁自噬需要NCOA4参与
4.5 讨论
第五章 PBDEQ诱导铁死亡发生
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验仪器
5.2.2 实验试剂
5.3 实验方法
5.3.1 细胞存活率检测实验
5.3.2 Western blot实验
5.3.3 二价铁离子染色实验
5.3.4 二价铁离子检测实验
5.3.5 PI染色实验
5.3.6 线粒体染色实验
5.4 实验结果
5.4.1 PBDEQ诱导细胞内铁离子含量升高
5.4.2 PBDEQ通过ROS诱导PC12细胞发生铁死亡
5.4.3 PBDEQ诱导的铁自噬促进铁死亡的发生
5.5 讨论
全文总结
参考文献
致谢
作者攻读硕士学位期间已发表科研成果
本文编号：3668911
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